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北京北方安道科技有限公司

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如何制作熒光顯微鏡標(biāo)本——北京北方安道提供

點(diǎn)擊次數(shù):4124 發(fā)布時(shí)間:2011-8-16

如何制作熒光顯微鏡標(biāo)本

北京北方安道科技——顯微鏡專業(yè)供應(yīng)商
   王瓊
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一,、熒光顯微鏡標(biāo)本制作要求
  (一)載玻片

  載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間,,太厚的坡片,一方面光吸收多,,另一方面不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚集,。載玻片必須光潔,,厚度均勻,,無(wú)明顯自發(fā)熒光,。有時(shí)需用石英玻璃載玻片,。

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  蓋玻片厚度在0.17mm左右,,光潔。為了加強(qiáng)激發(fā)光,,也可用干涉蓋玻片,,這是一種特制的表面鍍有若干層對(duì)不同波長(zhǎng)的光起不同干涉作用的物質(zhì)(如氟化鎂)的蓋玻片,它可以使熒光順利通過(guò),而反射激發(fā)光,,這種反射的激發(fā)光女可激發(fā)標(biāo)本,。

  (三)標(biāo)本

  組織切片或其他標(biāo)本不能太厚,,如太厚激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部,,而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外,,細(xì)胞重迭或雜質(zhì)掩蓋,,影響判斷。

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  封裱劑常用甘油,,必須無(wú)自發(fā)熒光,無(wú)色透明,,熒光的亮度在pH8.5~9.5時(shí)較亮,,不易很快褪去。所以,,常用甘油和0.5mol/l pH9.0~9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作封裱劑,。

  (五)鏡油

  一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標(biāo)本時(shí),,必須使用鏡油,,使用特制的無(wú)熒光鏡油,也可用上述甘油代替,,液體石蠟也可用,,只是折光率較低,對(duì)圖像質(zhì)量略有影響,。

二,、使用熒光顯微鏡的注意事項(xiàng)
  (1)嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說(shuō)明書要求進(jìn)行操作,,不要隨意改變程序,。
  (2)應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查,。進(jìn)入暗室后,,接上電源,點(diǎn)燃超高壓汞燈5~15min,,待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后,,眼睛*適應(yīng)暗室,再開(kāi)始觀察標(biāo)本,。
 ?。?)防止紫外線對(duì)眼睛的損害,,在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
 ?。?)檢查時(shí)間每次以1~2h為宜,,超過(guò)90min,超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降,,熒光減弱,;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后,熒光也明顯減弱,;所以,,zui多不得超過(guò)2~3h。
 ?。?)熒光顯微鏡光源壽命有限,標(biāo)本應(yīng)集中檢查,,以節(jié) 省時(shí)間,,保護(hù)光源。天熱時(shí),,應(yīng)加電扇散熱降溫,,新?lián)Q燈泡應(yīng)從開(kāi)始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí),,須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃,。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。
 ?。?)標(biāo)本染色后立即觀察,,因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,,可延緩熒光減弱時(shí)間,,防止封裱劑蒸發(fā)。
 ?。?)熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn):一般分為四級(jí),,即“一”—無(wú)或可見(jiàn)微弱熒光。“+”—僅能見(jiàn)明確可見(jiàn)的熒光,。“++”—可見(jiàn)有明亮的熒光,。“+++”—可見(jiàn)耀眼的熒光。

三,、熒光圖像的記錄方法
  熒光顯微鏡所看到的熒光圖像,,一是具有形態(tài)學(xué)特征,二是具有熒光的顏色和亮度,,在判斷結(jié)果時(shí),,必須將二者結(jié)合起來(lái)綜合判斷。結(jié)果記錄根據(jù)主觀指標(biāo),即憑工作者目力觀察,。作為一般定性觀察,,基本上可靠的。隨著技術(shù)科學(xué)的發(fā)展,,在不同程度上采用客觀指標(biāo)記錄判斷結(jié)果,,如用細(xì)胞分光光度計(jì),圖像分析儀等儀器,。但這些儀器記錄的結(jié)果,,也必須結(jié)合主觀的判斷。

  熒光顯微鏡攝影技術(shù)對(duì)于記錄熒光圖像十分必要,,由于熒光很易褪色減弱,,要即時(shí)攝影記錄結(jié)果。方法與普通顯微攝影技術(shù)基本相同,。只是需要采用高速感光膠片如ASA200以上或24,。以上。因紫外光對(duì)熒光猝滅作用大,,如FITC的標(biāo)記物,,在紫外光下照射30s,熒光亮度降低50%,。所以,,曝光速度太慢,就不能將熒光圖像拍攝下來(lái),。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動(dòng)或全自動(dòng)顯微攝影系統(tǒng)裝置,。

 

    北京北方安道科技有限公司專業(yè)經(jīng)營(yíng)范圍:尼康顯微鏡、奧林巴斯顯微鏡,、工業(yè)顯微鏡,、金相顯微鏡、測(cè)量顯微鏡,、偏光顯微鏡,、數(shù)碼顯微鏡、生物顯微鏡,、體視顯微鏡,、顯微鏡數(shù)碼相機(jī)接口、多波段冷光源,、體視顯微鏡冷光源,、數(shù)碼圖像處理系統(tǒng)及代理國(guó)內(nèi)外專業(yè)生產(chǎn)廠商的先進(jìn)高科技儀器(包括:進(jìn)口顯微鏡、離心機(jī),、天平,、超低溫冰箱等),。
    北京北方安道科技有限公司擁有一支由專業(yè)技術(shù)人員、銷售人員和維修人員組成的強(qiáng)大隊(duì)伍,,能為廣大客戶提供專業(yè)的顯微鏡技術(shù)咨詢,、產(chǎn)品選配、安裝調(diào)試,、應(yīng)用指導(dǎo),、維護(hù)保養(yǎng)在內(nèi)的整套服務(wù)。

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SMZ-B2體視顯微鏡
SMZ70體視顯微鏡
SMZ-B3大平臺(tái)體視顯微鏡
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DMC500顯微數(shù)碼成像系統(tǒng)


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