淋巴細(xì)胞分離液是一種根據(jù)細(xì)胞密度差異,,借助離心產(chǎn)生的重力加速度,,進(jìn)行細(xì)胞的分離純化的常用試劑。常用的淋巴細(xì)胞分離液有Ficoll淋巴細(xì)胞分離液,、Percoll淋巴細(xì)胞分離液,。Ficoll與Percoll分離單個(gè)核細(xì)胞的方法均為密度梯度離心法。
分離原理:外周血中單個(gè)核細(xì)胞和單核細(xì)胞,其體積,、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,,淋巴細(xì)胞分離液是一種密度介于1.075~1.090之間而近似于等滲的溶液,用它做密度梯度離心,使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,,從而將各種血細(xì)胞加以分離,。
淋巴細(xì)胞分離液的使用方法:
1、準(zhǔn)備無(wú)菌的15ml離心管或錐形管,;
2,、加入淋巴細(xì)胞分離液3ml;(注意:淋巴細(xì)胞分離液使用前需恢復(fù)室溫,,18-25℃)
3,、Hank~s液或PBS緩沖液1:1比列(如果全血樣本粘稠,,可適當(dāng)增大比例)稀釋抗凝過的全血樣品。
4,、小心沿著壁管,,接近分離液層面,非常緩慢地加入新鮮的稀釋過的全血樣品在淋巴細(xì)胞分離液上面,;(切記不要攪渾淋巴細(xì)胞分離液)
5,、小心放進(jìn)離心機(jī)(水平轉(zhuǎn)子),4℃離心20-30分鐘,,速度為400g-1000g,;(注意:離心機(jī)剎車應(yīng)取消,需等待自然停止)
6,、小心取出離管,,切記不要震動(dòng);
7,、可見上層為淡紅色透明血漿,,其次為薄薄的只密白色環(huán),白色環(huán)衛(wèi)單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞,。
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