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免疫組化中抗體選擇要求
1、一抗選擇要點(diǎn)
（1）選擇單克隆還是多克隆抗體,。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合，另一方面,，即使是同一個(gè)抗原決定簇,，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物,，稱為多克隆抗體,。在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng),，但親和力相對小,，檢測抗原靈敏度相對較低；而多克隆抗體特異性稍弱,，抗體的親和力強(qiáng),，靈敏度高,，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等有所避免）。
（2）種屬來源,。一般家兔來源的抗體多是多克?。欢∈髞碓吹目贵w多是單克隆,，但也有另外,。這條主要要與后面的二抗來源相匹配。
（3）實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測什么種屬的抗原,，即species reactivity,。這一點(diǎn)很重要，一般說明書上都有注明,，如小鼠Ms、大鼠Rat,、人Hum等等,。
（4）能否做免疫組化。一般一抗說明書都會(huì)注明做WB,、IHC,、ICC、IF等,，建議選擇注明的抗體,，因?yàn)橐话愣际墙?jīng)過文章證明。
（5）檢測標(biāo)本類型,。用于檢測石蠟切片還是冰凍切片,，一般能做石蠟切片的抗體，可能都可以用來檢測冰凍切片,，但能做冰凍切片的抗體,，不一定能檢測石蠟切片中的抗原。
（6）生產(chǎn)廠家,。我的經(jīng)驗(yàn)是國外抗體生產(chǎn)商原裝抗體質(zhì)量一般沒問題,，但有點(diǎn)貴；而國內(nèi)分裝廠家用的一抗工作液,，價(jià)格便宜,，但有時(shí)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性稍差，尤其不同批次重復(fù)性較差,。
（7）價(jià)格與質(zhì)量的矛盾,。我個(gè)人認(rèn)為一抗原裝質(zhì)量可能會(huì)好點(diǎn)，因?yàn)樵S多一抗避免反復(fù)凍融,，且在稀釋液中穩(wěn)定性較差（若時(shí)間長）,，但價(jià)格較貴。
2、二抗選擇要點(diǎn)
（1）種屬來源,。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源,，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊,、兔等均可）,。
（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP,、Biotin,、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗,，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng),；而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明,、FITC,、Cy3等常用熒光素。這主要與后面有無三抗和三抗種類有關(guān),。
（3）選擇IgM還是IgG,。一般一抗是IgM，那么二抗就選擇IgM,；反之,，一抗是IgG，則二抗選擇IgG,。
