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一,、細胞培養(yǎng)準備工作
準備工作對開展細胞培養(yǎng)異常重要,，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視,，準備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實驗失敗或無法進行,。準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗,、干燥與消毒,，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,，無菌室或超凈臺的清潔與消毒,，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試，具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻,。
二,、細胞培養(yǎng)取材
在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實驗?zāi)康亩ǎ?jīng)過一定的處理（如消化分散細胞,、分離等）后接入培養(yǎng)器皿中,，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程,。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng),。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養(yǎng),，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng),，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理,，盡快培養(yǎng),，因故不能馬上培養(yǎng)時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊,，置4℃的培養(yǎng)液中保存,。取組織時應(yīng)嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質(zhì),。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,，為減少污染可用抗菌素處理。由組織并分離分散細胞的方法可參閱有關(guān)文獻,。
三,、細胞的培養(yǎng)
將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng),。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,，幾個小時后組織塊可貼牢在底部,，再加入培養(yǎng)基。如系細胞培養(yǎng),，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進行細胞計數(shù),，按要求以一定的量（以每毫升細胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后,，立即放入培養(yǎng)箱中,，使細胞盡早進入生長狀態(tài)。正在培養(yǎng)中的細胞應(yīng)每隔一定時間觀察一次,，觀察的內(nèi)容包括細胞是否生長良好,，形態(tài)是否正常，有無污染,，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示）,，此外對培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養(yǎng)進入培養(yǎng)后有一段潛伏期（數(shù)小時到數(shù)十天不等）,，在潛伏期細胞一般不分裂,，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期,。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養(yǎng),，將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代",。二倍體細胞一般只能傳幾十代,，而轉(zhuǎn)化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細胞可能具有惡性性質(zhì),，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性,。培養(yǎng)正在生長中的細胞是進行各種生物醫(yī)學(xué)實驗的良好材料。
四,、凍存及復(fù)蘇
為了保存細胞,，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存,。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃,，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存,，zui終保存于液氮中,。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的,。復(fù)蘇一般采用快融方法,，即從液氮中取出凍存管后,，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解,。然后將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng),。凍存過程中保護劑的選用、細胞密度,、降溫速度及復(fù)蘇時溫度,、融化速度等都對細胞活力有影響。
細胞培養(yǎng)一般條件編輯
簡言之,，即細胞需要什么就提供什么,，道理是如此，真正能做到這點尚需時日,，人們至今對細胞的生命周期控制機理認識不足,，癌細胞雖然也來自正常細胞，但至今不知道究竟為什么癌細胞很難停止已經(jīng)啟動的有害分裂,，盡管如此,，人們長期的研究結(jié)果表明,，離體細胞培養(yǎng)需要的基本條件就是下列細胞生理條件,。
⑴溫度
溫度過低時細胞生長緩慢甚至不生長。利用冷凍保藏細胞可保持細胞的原有分裂分化能力,。溫度過高導(dǎo)致細胞死亡,。這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需要的zui適溫度決定的。多數(shù)生物大分子遇到高溫后容易導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改變或者喪失（變性）,。細胞膜遇到高溫后容易變tai,。在自然界，既有耐高溫的生物對付環(huán)境的機制研究在生物進化和農(nóng)業(yè),、環(huán)保,、發(fā)酵工業(yè)中意義重大。
