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核酸染料的機理是通過靜電吸附與DNA分子結(jié)合,,從而大大增加了DNA的發(fā)光。它的熒光信號強,,背景低,,不同于強效EB,毒性較低,,使用更安全,。雙鏈DNA在透射的紫外線下顯示綠色熒光,可用于RNA染色,。激發(fā)波長分別為268m,,294mm和491nm,前兩種是紫外光,,后者是可見光,。發(fā)射波長在530nm處產(chǎn)生。
核酸染料的使用方法:
1,、在微波爐中融化100m瓊脂凝膠溶液(濃度通常為0.8%?2),。
2、加入2-5ul,,并輕輕搖動以免產(chǎn)生氣泡,。
3、冷卻至不燙手時倒入凝膠,,瓊脂糖凝膠*固化后,,加載樣品進行電泳。
4,、電泳完成后,,使用可疑的凝膠成像系統(tǒng)或可見光透射儀進行觀察。如果您使用可疑的凝膠成像系統(tǒng)拍照,,則可以通過調(diào)節(jié)照明設(shè)備,,曝光時間并選擇合適的光片來獲得清晰的圖像和低背景的照片。
核酸染料的注意事項:
1,、膠水的厚度不應超過0.5cm,,膠水太厚會影響檢測的靈敏度。
2,、瓊脂凝膠的反復融化可能會影響核酸檢測的靈敏度,。
3、當通過凝膠電泳回收DNA時,,建議在自然光下進行染色和切割DNA譜帶,,以避免紫外線和EB對目標DNA的損害,這可以顯著改善分子生物學的下游水平,,例如作為克隆,,轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)錄,。
4、對皮膚和眼睛有一定刺激性,。操作時請戴手套。如果不小心觸摸皮膚,,則應立即清洗并正確處理廢物,。