激光捕獲顯微切割顯微鏡（LaserCaptureMicrodissection,LCM）是一種用于從組織切片中精準地分離和收集特定細胞或組織區(qū)域的技術(shù),。它結(jié)合了激光技術(shù)和顯微鏡的優(yōu)勢，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué),、基因組學(xué),、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等領(lǐng)域。其主要技術(shù)步驟如下：
1.樣本準備
組織切片制備：將待分析的組織或細胞樣本切成薄片（通常為5–10μm厚）,，并放置在適當(dāng)?shù)妮d玻片上,。通常使用冷凍切片機或石蠟切片機進行切割。切片后,，組織可以進行染色,，以幫助區(qū)分不同的細胞類型或組織結(jié)構(gòu)。
固定與染色：樣本需要經(jīng)過適當(dāng)?shù)墓潭ǎㄈ缡褂眉兹┗蚓凭潭ǎ┮苑乐菇M織退化,，并根據(jù)實驗需求進行染色,。常見的染色方法有H&E染色、免疫組織化學(xué)染色等,。
2.顯微鏡設(shè)置
顯微鏡調(diào)節(jié)：使用激光捕獲顯微切割顯微鏡的顯微鏡部分,，首先調(diào)整顯微鏡的放大倍率，確保能清晰地觀察到目標(biāo)細胞或組織區(qū)域,。
激光設(shè)置：根據(jù)需要設(shè)置適當(dāng)?shù)募す夤β屎徒咕?，以確保激光能夠精準地切割目標(biāo)區(qū)域。激光波長通常在紫外或紅外范圍內(nèi),，可以與不同的樣本類型進行兼容,。
3.激光捕獲與切割
定位目標(biāo)區(qū)域：通過顯微鏡實時觀察，定位需要捕獲的目標(biāo)區(qū)域,。操作人員可以通過圖像來確定目標(biāo)區(qū)域的形狀和大小,，并確保其周圍區(qū)域清晰可見。
激光切割：使用激光束直接切割目標(biāo)區(qū)域的組織,。激光切割過程會將切割的組織區(qū)域加熱,，形成蒸汽壓力，進而分離該區(qū)域,。激光可精確地去除目標(biāo)細胞或組織,，避免損傷周圍細胞。
4.組織捕獲
捕獲目標(biāo)細胞或區(qū)域：在激光切割的同時,，通常會使用一種透明的聚合物膜（例如聚乙烯醇膜）或直接在切片上進行激光加熱,，使目標(biāo)組織與載玻片分離,，并將其粘附到采集膜或目標(biāo)板上。
收集切割區(qū)域：被切割的組織通過激光系統(tǒng)被收集到微小的塑料捕獲帽或收集杯中,，通常這些容器可以包含用于進一步分析的溶液,。
5.后處理與分子分析
RNA/DNA/蛋白質(zhì)提取：捕獲的細胞或組織區(qū)域通常會被用于進一步的分子生物學(xué)分析,，例如RNA,、DNA或蛋白質(zhì)的提取。這些提取物可用于qPCR,、基因組測序,、RNA-seq、Westernblot等實驗,。
數(shù)據(jù)分析：通過對提取物的進一步分析,，研究人員可以獲得關(guān)于目標(biāo)細胞群體或區(qū)域的詳細分子信息，如基因表達譜,、突變分析等,。
6.數(shù)據(jù)解讀與驗證
分析數(shù)據(jù)：通過高通量技術(shù)（如基因表達芯片、RNA-seq等）,，可以獲得被捕獲細胞的分子特征,，進行差異分析或功能注釋。
驗證實驗：通常會進行驗證實驗,，如免疫熒光染色,、原位雜交等，以驗證激光切割獲取的樣本是否代表了目標(biāo)區(qū)域或細胞的特征,。
注意事項：
樣本質(zhì)量：為了獲得高質(zhì)量的捕獲樣本,，切片時的厚度、染色質(zhì)量,、組織的固定及切割方法都需要非常精確,。
激光能量控制：激光能量的過高可能會損傷周圍組織，因此在操作時需要特別注意控制激光功率,。
總結(jié)來說,，激光捕獲顯微切割顯微鏡技術(shù)通過精確地定位和切割目標(biāo)細胞或組織區(qū)域，結(jié)合高效的分子分析,，幫助研究人員獲取特定組織的高質(zhì)量樣本,，進行深度分析。
15
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)