腺病毒單克隆抗體
【簡單介紹】
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本司長期供應尼古?。商鎸帲z測試劑盒,,其主要品牌包括美國NovaBios,、廣州健侖,、廣州創(chuàng)侖等進口產品,,國產產品,,試劑盒的實驗方法是膠體金方法,。
【詳細說明】
腺病毒單克隆抗體
廣州健侖生物科技?有限公司
本司長期供應尼古?。商鎸帲z測試劑盒,其主要品牌包括美國NovaBios,、廣州健侖,、廣州創(chuàng)侖等進口產品,國產產品,,試劑盒的實驗方法是膠體金方法,。
我司還有很多違禁品檢測、激素檢測,、疫病類檢測,、腫瘤標志物檢測等抗原抗體原料,還有熒光FITC標記類抗體,、各種可標記單抗以及免疫磁珠等等產品以及各種生物原料和質控品等,,。
我司還提供其它進口或國產試劑盒:登革熱,、瘧疾,、流感、A鏈球菌,、合胞病毒,、腮病毒、乙腦,、寨卡,、黃熱病,、基孔肯雅熱、克錐蟲病,、違禁品濫用,、肺炎球菌、軍團菌,、化妝品檢測,、食品安全檢測等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清,、丹麥SSI診斷血清等產品,。
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3.鏈接同轉化反應
將純化產物鏈接至pGEM-T載體(Promega,USA),,并進一步轉化到感受態(tài)大腸桿菌DH5α中,,具體用步驟如下。
1)鏈接反應
a.短暫離心裝有載體嘅離心理,,以免液體掛喺理壁上,;
b.將反應體系加200ul嘅離心理,10ul反應體系具體加量如下:2xRapid Ligation Buffer 5ul,,pGEM-T載體lul,,PCR產物3ul,T4 DNA Ligase 1ul,;
c.用槍頭吸打撈勻反應體系,,4℃放置過夜反應。
2)轉化反應
a.由-70℃柜中拎出感受態(tài)細胞DH5α,,雪上放置10min解凍,,輕彈理壁以撈勻細胞;
b.短暫離心鏈接反應理,,攞曬量或者一半體積嘅鏈接反應物于解凍后嘅感受態(tài)細胞中輕彈撈勻,,凍水浴40min,中間浪一次,,防止菌體沉淀,;
c.拎出離心理,于42℃水浴90sec熱休克,;
d.冰浴2min,;
e.離心理中加900ul LB培養(yǎng)液(AMP-)(無菌用);
f. 37℃馴品噉振浪2h,,令細菌復蘇,;
g. 4000rpm常溫10min離心,反而去上清,保留150ul左右,,吹吸令菌體重溶,,往菌液中加3.5ul 200mg/mL IPTG同60ul二十mg/mL X-Gal撈勻,將撈液體扠于預早處理好嘅帶有Amp嘅平板培養(yǎng)基上,,等吸走啲后倒置放入37℃烘箱中,,培養(yǎng)12-16h,觀察藍白菌落,;
h.羅滅菌嘅10 mL試管若干,,加約3 mL左右嘅LB培養(yǎng)液(Amp);
i.用滅菌牙簽小心挑取白色菌落,,置于試管中,;
j. 37℃,250rpm/min振蕩培養(yǎng)過夜,,至溶液混濁,;
k.將經過培養(yǎng)后嘅菌體直接進行PCR檢測。
4.序列測定
經PCR檢測后將陽性克隆用于測序,。所有測序工均由大連TaKaRa公司做,,選用377測序儀。個個地理種群隨機撍3個樣本進行測序,,以佢哋嘅*序列為準。
5.序列分析
獲得嘅DNA序列先提交到GenBank數(shù)據(jù)庫中,,然后利用“BLAST”,,工具(NCBI站點)進行序列分析、DNA序列檢索,;用GenDoc軟件進行序列同源性比較,;用BioEdit軟件進行序列老編;用Clustal X軟件(Thompson等,,1997)進行序列比對(alignment),;比對結果輸入MEGA2.1軟件(Kumar等,2001),,采用腳法計算多唔同種類品間嘅遺傳腳,,并基于Kimura-2 Parameter模型,用鄰接法(Neighbor-Joining,,NJ)構建系統(tǒng)發(fā)育樹,,通過自展1000次檢驗獲得系統(tǒng)樹分支嘅置信度。
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