諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）說明書

【包裝規(guī)格】

20 測試/盒

【預(yù)期用途】

用于體外診斷。諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）是用免疫層析的方法快速定性

測定人糞便樣本中，基因1型（GGI）和基因2型（GGII）的諾如病毒,。該試劑可以協(xié)助診斷胃腸

炎，分析有疑似諾如病毒胃腸炎癥狀的兒童和成人的糞便樣本,。

【檢驗(yàn)原理】

諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）為快速、多步法側(cè)流免疫層析檢測,，應(yīng)用了抗

諾如病毒抗原的單克隆抗體,。在加樣孔旁的反應(yīng)窗內(nèi)，有兩條包被了固定抗體的平行線,。檢測線（T）包含了抗諾如病毒抗原的抗體,。質(zhì)控線C包含了抗鼠IgG的抗體。酶標(biāo)記物1包含了生物素化的抗諾如病毒抗原的抗體,，酶標(biāo)記物2是由結(jié)合了辣根過氧化物酶的鏈霉菌抗生物素蛋白組成,。檢測過程中，先從已經(jīng)準(zhǔn)備好的糞便樣本懸濁液中,，吸取一定量的上清液,，與一定量的酶標(biāo)記物1混合，加入檢測卡較小的窗口中（加樣孔）,。經(jīng)過室溫下10 分鐘的孵育后,，樣本和酶標(biāo)記物混合液被檢測膜吸收，并在過濾片上移動,。在這個過程中,，諾如病毒陽性標(biāo)本中的抗原-酶標(biāo)記物復(fù)合物，與檢測線上固定的抗諾如病毒抗體結(jié)合,，沒有結(jié)合抗原的生物素化的抗體則結(jié)合在質(zhì)控線上。之后加入酶標(biāo)記物2,，在室溫下孵育1 分鐘,，結(jié)合了過氧化物酶的鏈霉菌抗生物素，與通過特異性抗體而固定在膜上的生物素結(jié)合,。

在反應(yīng)窗加入洗液,，洗掉沒有結(jié)合的過氧化物酶,。如果測試為諾如病毒陽性，加入底物后三

分鐘,，在檢測線（T）上就會出現(xiàn)藍(lán)線,，同時質(zhì)控線（C）上也會出現(xiàn)藍(lán)線。如果質(zhì)控線沒有變藍(lán),，說明這次檢測的操作存在問題,，結(jié)果不可以用于診斷。

【主要組成成分】

試劑盒內(nèi)的試劑足夠進(jìn)行20次檢測

測試卡 Cassette 20次檢測 內(nèi)裝20個獨(dú)立包裝的測試卡

稀釋緩沖液 Diluent 30 ml 樣本稀釋緩沖液,，氯化鈉蛋白緩沖液,，含0.1% Kathon CG;

開瓶即用，藍(lán)色洗液 Wash 10ml 洗液,，磷酸化的氯化鈉,，含0.1% Thimerosal，開瓶即用

酶標(biāo)記物1 Conjugate│1 7ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的生物素標(biāo)記的抗諾如病毒抗體,，開瓶即用,，

酶標(biāo)記物2 Conjugate│2 5ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的鏈霉菌過氧化物酶，開瓶即用

底物 Substrate 7ml 過氧化氫/TMB,，開瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中裝有25支有刻度標(biāo)記的一次性塑料吸樣管

【儲存條件及有效期】

2－8 °C保存,，必須在有效期前使用。過有效期之后,，產(chǎn)品的質(zhì)量保證不再有效,。同樣，如果檢測卡的外殼破損將會使檢測卡潮濕,，我們將不能保證檢測卡適合使用,。

有效期：6個月

【樣本要求】

糞便樣本必須使用沒有任何添加劑的干凈容器收集，試驗(yàn)前儲存于溫度應(yīng)為2-8 °C,。在病人癥狀出現(xiàn)后（腹瀉和嘔吐）,，應(yīng)盡快進(jìn)行樣本采集，因?yàn)榘Y狀出現(xiàn)后1-3 天,，病毒的清除達(dá)到zui大化,。如果標(biāo)本保存時間超過3 天，必須儲存于-20 °C,。在實(shí)驗(yàn)開始前,，冷凍的樣本必須充分解凍，回復(fù)至室溫,。與新鮮樣本一樣,，復(fù)溫的樣本也必須在檢測前，和試劑充混合,。應(yīng)避免樣本多次凍融,。

采用直腸拭子采集樣本時,，必須得到足夠的糞便樣本（大約100 mg）以確保檢測進(jìn)行。

【檢測方法】

1.常規(guī)信息

檢測前,，樣本,、稀釋緩沖液、試劑和檢測卡必須恢復(fù)至室溫（20 - 25 °C）,。檢測卡必須在即將使用前才可以從外包裝中取出,，檢測卡一旦從外包裝中取出或被使用，則不可以再次使用,。檢測不可以在陽光直射下進(jìn)行,。

2.準(zhǔn)備樣本懸濁液

取1 ml樣本稀釋緩沖液Diluent 加入貼好標(biāo)簽的試管內(nèi)。對于液態(tài)糞便樣本,，可用盒內(nèi)的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl樣本（至吸液管的第二個增粗處）,，懸空滴加于事先已加入提取緩沖液的標(biāo)記試管中；對于固態(tài)糞便樣本,，取50-100mg樣本（豌豆大?。┘尤刖彌_液中。樣本必須被混勻,，可利用試管反復(fù)吸放,，或者用漩渦混勻器將糞便懸浮液混勻。至少沉淀2分鐘后,，取200- 500 μl上清液置于另一干凈試管中（或者未包被的微孔中）,。

3.將檢測卡Cassette從外包裝中取出，將其放置在水平的墊子上,。

4.用已經(jīng)處理過同一樣本的一次性吸管,，從糞便懸濁液中吸取250 μl上清液（*個標(biāo)記處），

加入干凈的,、標(biāo)記的試管中,。

5.在試管中加入6 滴酶標(biāo)記物1 Conjugate│1（滴加時保持小瓶垂直）。

6.通過吸放的方式將混合液*混勻后,，用一次性吸管將其全部吸出,，以緩慢平穩(wěn)連貫的水流，注入檢測卡的加樣孔中,。將吸管傾斜約 45°},，管口指向反應(yīng)窗，這樣混合物就可以全部流至反應(yīng)窗內(nèi),。__

7.將檢測卡在室溫下（20 - 25 °C）孵育10 分鐘,。確保反應(yīng)窗的檢測膜已被樣本混合液充分浸濕，否則請將100 μl 稀釋緩沖液滴入加樣孔中。

8.在反應(yīng)窗中加入4 滴酶標(biāo)記物2 Conjugate│2（滴加時保持小瓶垂直）,，再于室溫下孵育至少1分鐘。

9.在反應(yīng)窗中,，加入10滴洗液 Wash,，待洗液被*吸收后，再進(jìn)行后續(xù)操作,。

10.在反應(yīng)窗中加入6 滴底物 Substrate（滴加時保持小瓶垂直）,。

11.之后的3分鐘內(nèi)，讀出檢測結(jié)果,。在3分鐘后出現(xiàn)的有色條帶,，沒有診斷意義

【參考值（參考范圍）及檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. 在加入底物后3 分鐘之內(nèi)，在良好采光直視下讀出的檢測結(jié)果,，是zui可靠的,。

2. 查看在反應(yīng)窗的“C”標(biāo)記處，是否有出現(xiàn)藍(lán)色的條帶（所謂的內(nèi)部質(zhì)控線）,，在反應(yīng)窗的“T”標(biāo)記處是否出現(xiàn)藍(lán)色的條帶（所謂的檢測線）,。顏色的強(qiáng)度可能會由淺變深。

3. 陽性結(jié)果：加入底物之后3 分鐘內(nèi),，如果同時出現(xiàn)兩條藍(lán)色的條帶（檢測線“T”和質(zhì)控線“C”）,，可判別為陽性結(jié)果。顏色可由淺變深,。如果條帶只有部分清晰出現(xiàn),，也可以解釋為陽性。膜的其他顏色改變或其他部位的陰影,，都不能解釋為陽性結(jié)果,。

4. 陰性結(jié)果：加入底物的3 分鐘后，就可以開始判別是否為陰性結(jié)果或無效結(jié)果了,。如果只在反應(yīng)窗的質(zhì)控帶“C”處出現(xiàn)藍(lán)色的條帶,，在檢測帶“T”處沒有藍(lán)色條帶出現(xiàn)，則可判定為陰性結(jié)果,。陰性結(jié)果說明,，在樣本中沒有諾如病毒的抗原存在，或抗原的量低于檢測限,。

5. 無效結(jié)果：在反應(yīng)窗的檢測帶“T”和質(zhì)控帶“C”處,，均無藍(lán)色條帶出現(xiàn)，或者只在檢測帶

“T”出現(xiàn)條帶,，這兩種情況均說明檢測無效,，需要用新的檢測卡重新進(jìn)行檢測。

諾如病毒抗原快速檢測卡（免疫層析法）檢測結(jié)果的解釋：

【檢驗(yàn)方法的局限性】

諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）用于檢測基因1 型和基因2 型的諾如病毒，如

果病毒量沒有低于試劑的檢測限,，則可以檢測該種病毒是否在糞便樣本中出現(xiàn),。糞便樣本是否取樣于胃腸炎病人的癥狀表現(xiàn)期，對結(jié)果的影響是非常重要的,。檢測中出現(xiàn)藍(lán)色條帶的顏色強(qiáng)度,，不能反應(yīng)臨床癥狀的嚴(yán)重程度，只能提示糞便樣本中的病毒抗原量,。條帶的藍(lán)色可以從很淺的顏色變?yōu)楹苌畹念伾?/p>

陽性結(jié)果不能排除存在其他病原體感染,。在樣本中可能同時存在兩種及以上的病原體，需要

進(jìn)行鑒別的檢測以確診,。雙重或多重感染的癥狀會比一種感染引起的癥狀嚴(yán)重,。

陰性結(jié)果不能排除諾如病毒的存在或諾如病毒是引發(fā)胃腸炎的原因。此種情況可因以下原

因發(fā)生：間歇性病毒排出,、或者糞便樣本中病毒含量過低,，樣本采集時間不當(dāng)，運(yùn)輸或儲存條件

不適合,。如果病人高度懷疑病原體感染,，應(yīng)再重新留便復(fù)查。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中,，用諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）檢測113 例糞便樣本,。樣本

從胃腸炎患者的糞便中采集，既有散發(fā)病例,，也有爆發(fā)病例,。樣本收集于2007-2008 年的冬季，在德國漢堡的城市地區(qū)采集,。在當(dāng)?shù)氐男l(wèi)生研究所,，用RT-PCR 的方法檢測新鮮的樣本后，將樣本凍存,。2008 年7 月,，將冰凍的樣本融化后，在與之前相同的實(shí)驗(yàn)室,，用諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）和已上市的諾如病毒抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）,，同時進(jìn)行檢測。

【注意事項(xiàng)】

1. 僅用于體外診斷,。

2. 實(shí)驗(yàn)必須由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的人員操作,。必須嚴(yán)格按照醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度操作。

3. 產(chǎn)品操作時必須嚴(yán)格按照說明書操作,。

4. 樣品稀釋緩沖液中含有Kathon CG 作為防腐劑,，此物質(zhì)不能接觸皮膚或粘膜,。

5. 樣本和試劑不可以用嘴吸取。

6. 樣本和試劑避免接觸受傷的皮膚或者粘膜,。

7. 處理樣本時應(yīng)該戴一次性手套,，完成試驗(yàn)后要洗手。

8. 禁止在樣本和試劑實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)吸煙,、吃東西或喝水,。

9. 所有試劑和材料如果接觸有潛在感染性的樣本，應(yīng)與樣本一樣,，立即用適當(dāng)?shù)南緞ㄈ纾?/p>

次氯酸鈉）或者高壓高溫121℃至少1 小時處理。

10. 諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）必須在效期內(nèi)使用,。所有的試劑都被調(diào)整

為zui適宜的活性狀態(tài),。稀釋或改變這些試劑將減少其活性。如果不按照說明中的時

間和溫度進(jìn)行操作,，將會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果,。

11. 不同批號的諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）試劑盒中的試劑不可以混用。

12. 試劑和樣本必須避免微生物的污染,，否則將會影響檢測結(jié)果,。

13. 吸取每個樣本時，必須使用不同的吸管,，以防止交叉污染及錯誤結(jié)果

14. 每個檢測卡只可使用一次

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