諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）說明書

【包裝規(guī)格】

20 測試/盒

【預期用途】

用于體外診斷,。諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）是用免疫層析的方法快速定性

測定人糞便樣本中,，基因1型（GGI）和基因2型（GGII）的諾如病毒,。該試劑可以協(xié)助診斷胃腸

炎，分析有疑似諾如病毒胃腸炎癥狀的兒童和成人的糞便樣本,。

【檢驗原理】

諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）為快速,、多步法側流免疫層析檢測，應用了抗

諾如病毒抗原的單克隆抗體,。在加樣孔旁的反應窗內(nèi),，有兩條包被了固定抗體的平行線。檢測線（T）包含了抗諾如病毒抗原的抗體,。質(zhì)控線C包含了抗鼠IgG的抗體,。酶標記物1包含了生物素化的抗諾如病毒抗原的抗體，酶標記物2是由結合了辣根過氧化物酶的鏈霉菌抗生物素蛋白組成,。檢測過程中,，先從已經(jīng)準備好的糞便樣本懸濁液中，吸取一定量的上清液,，與一定量的酶標記物1混合,，加入檢測卡較小的窗口中（加樣孔）。經(jīng)過室溫下10 分鐘的孵育后,，樣本和酶標記物混合液被檢測膜吸收,，并在過濾片上移動。在這個過程中,，諾如病毒陽性標本中的抗原-酶標記物復合物,，與檢測線上固定的抗諾如病毒抗體結合，沒有結合抗原的生物素化的抗體則結合在質(zhì)控線上,。之后加入酶標記物2,，在室溫下孵育1 分鐘，結合了過氧化物酶的鏈霉菌抗生物素,，與通過特異性抗體而固定在膜上的生物素結合,。

在反應窗加入洗液，洗掉沒有結合的過氧化物酶,。如果測試為諾如病毒陽性,，加入底物后三

分鐘，在檢測線（T）上就會出現(xiàn)藍線,，同時質(zhì)控線（C）上也會出現(xiàn)藍線,。如果質(zhì)控線沒有變藍，說明這次檢測的操作存在問題,，結果不可以用于診斷,。

【主要組成成分】

試劑盒內(nèi)的試劑足夠進行20次檢測

測試卡 Cassette 20次檢測 內(nèi)裝20個獨立包裝的測試卡

稀釋緩沖液 Diluent 30 ml 樣本稀釋緩沖液，氯化鈉蛋白緩沖液,，含0.1% Kathon CG;

開瓶即用,，藍色洗液 Wash 10ml 洗液，磷酸化的氯化鈉,，含0.1% Thimerosal,，開瓶即用

酶標記物1 Conjugate│1 7ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的生物素標記的抗諾如病毒抗體,，開瓶即用，

酶標記物2 Conjugate│2 5ml 穩(wěn)定蛋白溶液中的鏈霉菌過氧化物酶,，開瓶即用

底物 Substrate 7ml 過氧化氫/TMB,，開瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中裝有25支有刻度標記的一次性塑料吸樣管

【儲存條件及有效期】

2－8 °C保存，必須在有效期前使用,。過有效期之后,，產(chǎn)品的質(zhì)量保證不再有效。同樣,，如果檢測卡的外殼破損將會使檢測卡潮濕,，我們將不能保證檢測卡適合使用。

有效期：6個月

【樣本要求】

糞便樣本必須使用沒有任何添加劑的干凈容器收集,，試驗前儲存于溫度應為2-8 °C,。在病人癥狀出現(xiàn)后（腹瀉和嘔吐），應盡快進行樣本采集,，因為癥狀出現(xiàn)后1-3 天,，病毒的清除達到zui大化。如果標本保存時間超過3 天,，必須儲存于-20 °C,。在實驗開始前，冷凍的樣本必須充分解凍,，回復至室溫,。與新鮮樣本一樣，復溫的樣本也必須在檢測前,，和試劑充混合,。應避免樣本多次凍融。

采用直腸拭子采集樣本時,，必須得到足夠的糞便樣本（大約100 mg）以確保檢測進行,。

【檢測方法】

1.常規(guī)信息

檢測前,，樣本,、稀釋緩沖液、試劑和檢測卡必須恢復至室溫（20 - 25 °C）,。檢測卡必須在即將使用前才可以從外包裝中取出,，檢測卡一旦從外包裝中取出或被使用，則不可以再次使用,。檢測不可以在陽光直射下進行,。

2.準備樣本懸濁液

取1 ml樣本稀釋緩沖液Diluent 加入貼好標簽的試管內(nèi)。對于液態(tài)糞便樣本,，可用盒內(nèi)的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl樣本（至吸液管的第二個增粗處）,，懸空滴加于事先已加入提取緩沖液的標記試管中,；對于固態(tài)糞便樣本，取50-100mg樣本（豌豆大?。┘尤刖彌_液中,。樣本必須被混勻，可利用試管反復吸放,，或者用漩渦混勻器將糞便懸浮液混勻,。至少沉淀2分鐘后，取200- 500 μl上清液置于另一干凈試管中（或者未包被的微孔中）,。

3.將檢測卡Cassette從外包裝中取出,，將其放置在水平的墊子上。

4.用已經(jīng)處理過同一樣本的一次性吸管,，從糞便懸濁液中吸取250 μl上清液（*個標記處）,，

加入干凈的、標記的試管中,。

5.在試管中加入6 滴酶標記物1 Conjugate│1（滴加時保持小瓶垂直）,。

6.通過吸放的方式將混合液*混勻后，用一次性吸管將其全部吸出,，以緩慢平穩(wěn)連貫的水流,，注入檢測卡的加樣孔中。將吸管傾斜約 45°},，管口指向反應窗,，這樣混合物就可以全部流至反應窗內(nèi)。__

7.將檢測卡在室溫下（20 - 25 °C）孵育10 分鐘,。確保反應窗的檢測膜已被樣本混合液充分浸濕,，否則請將100 μl 稀釋緩沖液滴入加樣孔中。

8.在反應窗中加入4 滴酶標記物2 Conjugate│2（滴加時保持小瓶垂直）,，再于室溫下孵育至少1分鐘,。

9.在反應窗中，加入10滴洗液 Wash,，待洗液被*吸收后,，再進行后續(xù)操作。

10.在反應窗中加入6 滴底物 Substrate（滴加時保持小瓶垂直）,。

11.之后的3分鐘內(nèi),，讀出檢測結果。在3分鐘后出現(xiàn)的有色條帶,，沒有診斷意義

【參考值（參考范圍）及檢驗結果的解釋】

1. 在加入底物后3 分鐘之內(nèi),，在良好采光直視下讀出的檢測結果，是zui可靠的,。

2. 查看在反應窗的“C”標記處,，是否有出現(xiàn)藍色的條帶（所謂的內(nèi)部質(zhì)控線）,，在反應窗的“T”標記處是否出現(xiàn)藍色的條帶（所謂的檢測線）。顏色的強度可能會由淺變深,。

3. 陽性結果：加入底物之后3 分鐘內(nèi),，如果同時出現(xiàn)兩條藍色的條帶（檢測線“T”和質(zhì)控線“C”），可判別為陽性結果,。顏色可由淺變深,。如果條帶只有部分清晰出現(xiàn)，也可以解釋為陽性,。膜的其他顏色改變或其他部位的陰影,，都不能解釋為陽性結果。

4. 陰性結果：加入底物的3 分鐘后,，就可以開始判別是否為陰性結果或無效結果了,。如果只在反應窗的質(zhì)控帶“C”處出現(xiàn)藍色的條帶，在檢測帶“T”處沒有藍色條帶出現(xiàn),，則可判定為陰性結果,。陰性結果說明，在樣本中沒有諾如病毒的抗原存在,，或抗原的量低于檢測限,。

5. 無效結果：在反應窗的檢測帶“T”和質(zhì)控帶“C”處，均無藍色條帶出現(xiàn),，或者只在檢測帶

“T”出現(xiàn)條帶,，這兩種情況均說明檢測無效，需要用新的檢測卡重新進行檢測,。

諾如病毒抗原快速檢測卡（免疫層析法）檢測結果的解釋：

【檢驗方法的局限性】

諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）用于檢測基因1 型和基因2 型的諾如病毒,，如

果病毒量沒有低于試劑的檢測限，則可以檢測該種病毒是否在糞便樣本中出現(xiàn),。糞便樣本是否取樣于胃腸炎病人的癥狀表現(xiàn)期,，對結果的影響是非常重要的。檢測中出現(xiàn)藍色條帶的顏色強度,，不能反應臨床癥狀的嚴重程度,，只能提示糞便樣本中的病毒抗原量。條帶的藍色可以從很淺的顏色變?yōu)楹苌畹念伾?/p>

陽性結果不能排除存在其他病原體感染,。在樣本中可能同時存在兩種及以上的病原體,，需要

進行鑒別的檢測以確診。雙重或多重感染的癥狀會比一種感染引起的癥狀嚴重,。

陰性結果不能排除諾如病毒的存在或諾如病毒是引發(fā)胃腸炎的原因。此種情況可因以下原

因發(fā)生：間歇性病毒排出,、或者糞便樣本中病毒含量過低,，樣本采集時間不當,，運輸或儲存條件

不適合。如果病人高度懷疑病原體感染,，應再重新留便復查,。

【產(chǎn)品性能指標】

在驗證實驗中，用諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）檢測113 例糞便樣本,。樣本

從胃腸炎患者的糞便中采集,，既有散發(fā)病例，也有爆發(fā)病例,。樣本收集于2007-2008 年的冬季,，在德國漢堡的城市地區(qū)采集。在當?shù)氐男l(wèi)生研究所,，用RT-PCR 的方法檢測新鮮的樣本后,，將樣本凍存。2008 年7 月,，將冰凍的樣本融化后,，在與之前相同的實驗室，用諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）和已上市的諾如病毒抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）,，同時進行檢測,。

【注意事項】

1. 僅用于體外診斷。

2. 實驗必須由經(jīng)過專業(yè)培訓的人員操作,。必須嚴格按照醫(yī)學實驗室的規(guī)章制度操作,。

3. 產(chǎn)品操作時必須嚴格按照說明書操作。

4. 樣品稀釋緩沖液中含有Kathon CG 作為防腐劑,，此物質(zhì)不能接觸皮膚或粘膜,。

5. 樣本和試劑不可以用嘴吸取。

6. 樣本和試劑避免接觸受傷的皮膚或者粘膜,。

7. 處理樣本時應該戴一次性手套,，完成試驗后要洗手。

8. 禁止在樣本和試劑實驗區(qū)域內(nèi)吸煙,、吃東西或喝水,。

9. 所有試劑和材料如果接觸有潛在感染性的樣本，應與樣本一樣,，立即用適當?shù)南緞ㄈ纾?/p>

次氯酸鈉）或者高壓高溫121℃至少1 小時處理,。

10. 諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）必須在效期內(nèi)使用。所有的試劑都被調(diào)整

為zui適宜的活性狀態(tài),。稀釋或改變這些試劑將減少其活性,。如果不按照說明中的時

間和溫度進行操作，將會導致錯誤的結果。

11. 不同批號的諾如病毒抗原快速檢測試劑卡（免疫層析法）試劑盒中的試劑不可以混用,。

12. 試劑和樣本必須避免微生物的污染,，否則將會影響檢測結果。

13. 吸取每個樣本時,，必須使用不同的吸管,，以防止交叉污染及錯誤結果

14. 每個檢測卡只可使用一次

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