熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器,。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度,、量子產率,、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況,。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化,, 從而闡明分子結構與功能之間的關系,。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm,??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描,。對經(jīng)光源激發(fā)后產生熒光的物質或經(jīng)化學處理后產生熒光的物質成份分析,,可應用于生物化學、生物醫(yī)學、環(huán)境化工等部門,。
熒光光譜法具有靈敏度高,、選擇性強、用樣量少,、方法簡便,、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點,可以廣泛應用于生命科學,、醫(yī)學,、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域,。
熒光分光光度計基本原理
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,,激發(fā)樣品中的熒光物質發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,,被光電倍增管所接受,,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。
物質熒光的產生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,,從而產生熒光.
不同物質由于分子結構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定,。
在溶液中,當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關系,即IF=KC,利用這種關系可以進行熒光物質的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,,熒光分析通常也采用標準曲線法進行,。
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