慶大霉素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

一,、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,，樣本中的殘留物慶大霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗慶大霉素抗體,，加入酶標(biāo)記物后，用 TMB 底物顯色,，樣本吸光值與其所含殘留物慶大霉素的含量成負(fù)相關(guān),，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物慶大霉素的含量。

二,、試劑盒特性

• 試劑盒靈敏度：  0.05ppb

u 孵育溫度： 25℃

u 孵育時(shí)間： 30min～15min

• 樣本檢測(cè)下限

• 交叉反應(yīng)率

• 樣本回收率

組織 ······································ 90%±20%

肝臟 ······································ 80%±20%

牛奶 ·······································   90%±18%

三,、試劑盒組成

四,、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標(biāo)儀,、均質(zhì)器,、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管,、天平（感量 0.01g）,、恒溫箱

微量移液器：?jiǎn)蔚?20～200µl、單道 100～1000µl,、

多道 30～300 µl

五,、樣本前處理步驟

• 樣本處理前須知

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭,。

（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

• 樣本前處理需配制：配液 1 樣本提取液：

• 10X 濃縮提取液用去離子水按 1：9 稀釋,。

• 樣本處理：

（a）組織（雞肉、豬肉,、魚肉,、蝦）、肝臟（雞肝,、豬肝）樣本處理方法

1,、取 1±0.05g 去除脂肪的粉碎樣本，加入 5ml 樣本提取液,，振蕩 3min,；4000r/min，室溫離心

10min,；2,、取 50µl 上清液，加入 450µl 樣本復(fù)溶液混勻,，

混合 30s,；3、取 50µl 用于分析,。

樣本稀釋倍數(shù)：50

（b） 牛奶樣本處理方法

1,、取 0.5ml 均質(zhì)的牛奶樣本，加入 2ml 樣本提取

液,，振蕩 2min,；4000r/min，室溫離心 5min,；2,、取 50µl 上清液，加入 450µl 樣本復(fù)溶液混勻,，

混合 30s,；3,、取 50µl 用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：50

六,、酶標(biāo)免疫分析程序:

• 測(cè)定前應(yīng)須知：

1,、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫

（20～25℃）。

2,、 使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃,。

3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,，很大程度上取決于洗板的*性,，正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定程序中的要點(diǎn)。

4,、 所有恒溫孵育過(guò)程,，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板,。

• 操作步驟：

1,、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～

25℃）平衡 30min 以上,，注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。

2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,，將不用的微孔放

入自封袋,，保存于 2-8℃。

3,、配液：將 15ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份

去離子水）,，或按所需用量配制洗滌液。4,、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每

個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。

5,、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中，加入酶標(biāo)記物 50µl/孔,，然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔,，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min,。

6,、將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4～5 次,，每次間隔 15～30 秒,，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）,。

7、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔,，再加入底物 B 液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻,，25℃環(huán)境中避光顯色 15min,。

8、測(cè)定：加入終止液 50µl/孔,，輕輕振蕩混勻,，設(shè)定酶標(biāo)儀于 450nm 處（建議用雙波長(zhǎng) 450/630n m 檢測(cè)，5min 內(nèi)讀數(shù)）,，測(cè)定每孔 OD 值,。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,，粗略判定可用第 1 種方法,，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含慶大霉素量成負(fù)相關(guān),。

1,、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,，樣本 2 的吸光度值為 1.0,，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：

0ppb 為 2.243；0.05ppb 為 1.816,；0.15ppb 為 1.415,； 0.45ppb 為 0.74；1.35ppb 為 0.313,；4.05ppb 為 0.155,。則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb～4.05ppb；樣本 2

的濃度范圍是 0.15ppb～0.45ppb,，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實(shí)際濃度,。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計(jì)算,，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0 標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值,，再乘以 100%，即

B

百分吸光率（%）＝ ×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),，以慶大霉素標(biāo)

準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實(shí)際濃度,。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確,、快速分析,。

八、 注意事項(xiàng)

1,、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20～

25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低,。

2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,，則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。

3,、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。

4,、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸，避免接觸皮膚,。

5,、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度,、OD 值變化,；不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6,、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封,；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下,。

7,、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之,。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),，表示試劑可能變質(zhì)。

8,、該試劑盒理想反應(yīng)溫度為 25℃,，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九,、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

1,、儲(chǔ)藏條件：試劑盒于 2～8℃保存，不要冷凍,。

2,、保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年,，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,，酶標(biāo)板仍然正常有效,，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)放心使用,。

氯霉素檢測(cè)試劑盒

三聚氰胺檢測(cè)試劑盒