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| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | YJ2011 |
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| 應用領域 | 環(huán)保,食品,生物產業(yè),農業(yè) |
四環(huán)素快速檢測試劑盒說明書
一,、原理
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法,，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物四環(huán)素將和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗四環(huán)素抗體,，加入酶標記物后,，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素的含量成負相關,，與標準曲線比較即可得出相應殘留物四環(huán)素的含量,。
二、試劑盒特性
u | 孵育溫度： | 25℃ |
u | 孵育時間： | 30min～15min |
u | 樣本檢測下限 |
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雞肉樣本： |
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四環(huán)素 | 0.4ppb |
二甲按胺四環(huán)素 | 0.4ppb |
吡四環(huán)素 | 0.4ppb |
金霉素 | 0.4ppb |
脫甲基金霉素 | 1.2ppb |
土霉素 | 0.8ppb |
強力霉素 | 1ppb |
豬肉,、蜂蜜樣本： |
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四環(huán)素 | 0.5ppb |
二甲按胺四環(huán)素 | 0.5ppb |
吡四環(huán)素 | 0.5ppb |
金霉素 | 0.5ppb |
脫甲基金霉素 | 1.5ppb |
土霉素 | 1ppb |
強力霉素 | 1.2ppb |
四環(huán)素 100%
二甲按胺四環(huán)素 125%
吡四環(huán)素 | 110% |
金霉素 | 100% |
脫甲基金霉素 | 35% |
土霉素 | 58% |
強力霉素 | 45% |
雞肉,、豬肉、蜂蜜 85±20%
三,、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條 8 孔，一板 12 條 | |
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2 | 標準品濃縮液 | 1ml | 黑色帽 |
（81ppb） | |||
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3 | 高濃度標準品 | 1ml | 黑色帽 |
（100ppb） | |||
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4 | 酶標記物 | 7ml | 白色帽 |
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5 | 抗體工作液 | 7ml | 白色帽 |
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6 | 底物 A 液 | 7ml | 白色帽 |
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7 | 底物 B 液 | 7ml | 黑色帽 |
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8 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
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9 | 20X 濃縮洗滌液 | 15ml | 白色帽 |
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10 | 10X 樣本提取液 | 50ml*2 | 透明帽 |
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11 | 標準品復溶液 | 15ml*2 | 藍色帽 |
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四,、所用儀器,、試劑
具備的儀器：酶標儀、均質器,、振蕩器,、離心機、刻度移液管,、天平（感量 0.01g）,、恒溫箱
微量移液器：單道 20～200µl、單道 100～1000µl,、
多道 30～300 µl
試 劑：甲醇
五,、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭,。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,，
必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實 | 3,、 在 ELISA 分析中的再現性,，很大程度上取決于 | |||||
驗結果。 | 洗板的*性,，正確的洗板操作是 ELISA 測定 | |||||
u | 樣本前處理需配制： | 程序中的要點,。 |
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配液 1 | 樣本提取液 A | 4,、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射,，用蓋板膜 | ||||
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| 用去離子水450ml 與50ml 10X 樣本提取液 | 蓋住微孔板,。 |
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| 混勻或按 9：1 的比例按需配制（如 10X | u 操作步驟： |
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| 樣本提取液有結晶，需溶解后在進行稀 | 1,、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,，室溫（20～ | |||
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| 釋）。 | 25℃）平衡 30min 以上,，注意每種液體試劑使 | |||
配液 2 | 樣本提取液 B | 用前均須搖勻。 |
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| 取甲醇 50ml 與 450ml 樣本提取液 A 混勻 | 2,、配制標準品 |
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| 或按 1：9 的比例按需配制,。 | 標準品 6：50µl 標準品濃縮液（81ppb）用 950µl | |||
配液 3 | 樣本提取液 C | 標準品復溶液稀釋 | 4.05ppb | |||
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| 取甲醇 100ml 與 270ml 樣本提取液 A 混勻 | 標準品 5：600µl 標準品復溶液與 300µl 標準品 6 | |||
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| 或按 10：27 的比例按需配制。 | 混合 | 1.35ppb | ||
u | 樣本處理： | 標準品 4：600µl 標準品復溶液與 300µl 標準品 5 | ||||
（a）雞肉處理方法 | 混合 | 0.45ppb | ||||
1,、稱取 1±0.05g 均質后的樣本于 50ml 離心管中,， | 標準品 3：600µl 標準品復溶液與 300µl 標準品 4 | |||||
| 加入 8ml 樣本提取液 A（見配液 1），振蕩 3min,， | 混合 | 0.15ppb | |||
| 室溫 4000r/min 以上,，離心 10min； | 標準品 2：600µl 標準品復溶液與 300µl 標準品 3 | ||||
2,、取 50 上清液用于分析 | 混合 | 0.05ppb | ||||
| 樣本稀釋倍數: 8 倍 | 標準品 1：標準品復溶液 | 0ppb | |||
（b）豬肉處理方法 | 3,、取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放 | |||||
1,、稱取 1±0.05g 均質后的樣本于 50ml 離心管中,， | 入自封袋，保存于 2-8℃,。 |
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| 加入 10ml 樣本提取液 B（見配液 2）,，振蕩 3min， | 4,、配液：將 15ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去 | ||||
| 室溫 4000r/min 以上,，離心 10min； | 離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份 | ||||
2,、取 50 µl 上清液用于分析 | 去離子水）,，或按所需用量配制洗滌液。 | |||||
| 樣本稀釋倍數: 10 倍 | 5、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號,，每 | ||||
（c）蜂蜜處理方法 | 個樣本和標準品做 2 孔平行,，并記錄標準孔和 | |||||
1、 稱取 1±0.05g 均質后的樣本于 50ml 離心管中,， | 樣本孔所在的位置。 |
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| 加入10ml 樣本提取液C（見配液3），振蕩3min,， | 6、加標準品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中,，然后加 | ||||
| 室溫 4000r/min 以上,，離心 10min； | 加入酶標記物 50µl/孔再加入抗體工作液 50µl/ | ||||
2,、 取 50 µl 上清液用于分析 | 孔,，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻,。25℃環(huán)境 | |||||
| 樣本稀釋倍數: 10 倍 | 中反應 30min,。 |
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| 7、將孔內液體甩干,，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔 | |||||
六,、酶標免疫分析程序: | ||||||
洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒,，用吸水紙 | ||||||
u | 測定前應須知： | |||||
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1,、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫 | 拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺 | |||||
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（20～25℃）。 | 破）,。 | |||||
8,、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B | ||||||
2,、 使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃,。 | ||||||
液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻,，25℃環(huán)境中避光顯 | ||||||
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色 15min,。
9、測定：加入終止液 50µl/孔,，輕輕振蕩混勻,，設定酶標儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測，5min 內讀數），測定每孔 OD 值,。
七,、結果判定
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方法,，定量判定用第 2 種方法,。注意樣本吸光度值與其所含四環(huán)素量成負相關。
1,、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml),。假設樣本 1 的吸光度值為 0.3，樣本 2 的吸光度值為 1.0,，標準液吸光度值分別是：
0ppb 為 2.243,；0.05ppb 為 1.816；0.15ppb 為 1.415,； 0.45ppb 為 0.74,；1.35ppb 為 0.313；4.05ppb 為 0.155,。
則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb～4.05ppb；樣本 2
的濃度范圍是 0.15ppb～0.45ppb,，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中四環(huán)素實際濃度,。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算,，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標準（0 標準）的吸光度值，再乘以 100%,，即
B
百分吸光率（%）＝ ×100%
B0
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算以標準品百分吸光率為縱坐標,，以四環(huán)素標準
品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中四環(huán)素實際濃度,。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,，更便于大量樣本的準確、快速分析,。
八,、 注意事項
1、室溫低于 25℃或試劑及標本未回到室溫（20～
25℃）會導致所有標準的 OD 值偏低,。
2,、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性,，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作,。
3,、混合要均勻,，否則會出現重復性不好的現象。
4,、反應終止液為 2M 硫酸，避免接觸皮膚,。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒,；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度,、OD 值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑,。
6,、不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感,，因此要避免直接暴露在光線下,。
7、顯色液若有任何顏色表明變質,，應當棄之,。標準品 1 的吸光度值小于 0.5 時,，表示試劑可能變質,。
8、該試劑盒理想反應溫度為 25℃,，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化,。
九、儲藏條件和保質期
1,、儲藏條件：試劑盒于 2-8℃保存,，不要冷凍。
2,、保 質 期：該產品有效期為 1 年,，生產日期見包裝盒,。
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效,，不影響實驗結果,，請放心使用。
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