葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)檢測(cè)試劑盒(簡(jiǎn)易微板法)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

葡糖-6-磷酸脫氫酶( glucose 6-phosphatedehydrogenase，G-6-PD 或 G6PD)是糖酵解途徑,、檸檬酸循環(huán)以外的另一個(gè)葡萄糖分解途徑的磷酸葡萄糖酸途徑(磷酸戊糖途徑)中

的*個(gè)酶(EC1.1.1.49),。

葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)檢測(cè)試劑盒(簡(jiǎn)易比色法)其檢測(cè)原理是紅細(xì)胞 G-6-PD 催化葡萄糖-6-磷酸葡萄糖-內(nèi)酯，后者很快氧化成 6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),，同時(shí) NAPD 被還原成 NADPH,，其反應(yīng)公式如下：

G-6-P+NAPD+  →6-PGA+L-NADPH,。

在上述偶聯(lián)反應(yīng)中，NADPH 生成速率與樣本中酶活性呈正比,，通過酶標(biāo)儀或自勱分析

儀在 340nm 處檢測(cè)吸光度升高速率( A/min),，升高速率( A/min)與 G-6-PD 活性呈正，直接計(jì)算酶的活性單位,。100T 該試劑盒試劑可以檢測(cè) 50 次樣本,，該試劑盒僅用于科研領(lǐng)

域，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1,、生理鹽水

2、水浴鍋

3,、96 孔板

4,、酶標(biāo)儀

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備溶血液：取新鮮抗凝血,，離心取上清及白細(xì)胞層,，用 4℃預(yù)冷的生理鹽水洗滌 2 次，

每次取上清時(shí),，務(wù)必去除剩余的白細(xì)胞層,，再加預(yù)冷的生理鹽水配成含紅細(xì)胞壓積為

30%的紅細(xì)胞懸液，4℃保存備用,。臨用前,，以樣本稀釋液稀釋 25 倍，即為溶血液,。4℃

保存 10h,，-20℃保存 48h。

2,、配制 NADP 儲(chǔ)存液：取 9mg NADP 溶解于 1ml G6PD assay buffer,，充分混勻，配制

成 NADP 儲(chǔ)存液(9mg/ml),，-20℃保存備用,。

3、配制檢測(cè)工作液：取 NADP 儲(chǔ)存液和 G6PD assay buffer,，按 NADP 儲(chǔ)存液(9mg/ml)：

G6PD assay buffer=1：49 的比例混合,，即為檢測(cè)工作液。-20℃保存,，一個(gè)月有效,。4、配制 G-6-P 工作液：取 G-6-P 1 支溶解于 G-6-P 稀釋液 10ml,，混勻,，即為 G-6-P 工

作液,，分裝成小份后，-20℃保存備用,。

5,、分光光度計(jì)檢測(cè)：按照下表設(shè)置空白管、測(cè)定管,，溶液應(yīng)按照順序依次加入,，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,。

混勻,，37℃孵育 60s，在 340nm 處 1-3min 各管吸光度

變化,，計(jì)算各管  A/min,。

6,、生化分析儀檢測(cè)：按照下表設(shè)置主要參數(shù),。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用

計(jì)算：

6

   分光光度計(jì)計(jì)算公式：G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(250/5)= A/min×8040

式中：6220=NADH 的吸光度250=反應(yīng)液的總體積(μl) 5=待測(cè)樣品體積(μl)

生化分析儀計(jì)算公式：G6PD(U/L)= A/min×(10 /6220)×(303/6)= A/min×8040

6

式中：  A/min=測(cè)定的 340nm 吸光度的升高速率

6220=NADH 的吸光度303=反應(yīng)液的總體積(μl) 6=待測(cè)樣品體積(μl)

參考范圍：

成年健康人紅細(xì)胞 G6PD：8-18U/g Hb

注意事項(xiàng)：

1,、 血清中 G6PD 活性在室溫可以保存 2 天，4℃保存 1 周,，-20℃保存 1 個(gè)月,。

2、 嚴(yán)重黃疸,、脂血或溶血的血清,，可能會(huì)引起測(cè)定管吸光度增高。

3,、 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個(gè)月有效,。