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當前位置:上海研謹生物科技有限公司>>分離液,、分離液試劑盒>>分離液試劑盒>> ISHY2011G狗胰島細胞分離液試劑盒
產(chǎn)品型號ISHY2011G
品 牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時間:2024-08-28 09:57:25瀏覽次數(shù):1767次
聯(lián)系我時,,請告知來自 化工儀器網(wǎng)操作說明 細胞分離液試劑盒操作說明::::
Store at:::RT 試劑盒規(guī)格::::2×100ml/Kit
狗胰島細胞分離液試劑盒:
貨號 品牌 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 報價
WBC1092Z | TBD | 小鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC10965 | TBD | 兔外周血白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC10965P | TBD | 兔臟器組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC10965Z | TBD | 兔腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1079 | TBD | 狗外周血白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1079P | TBD | 狗臟器組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1079Z | TBD | 狗腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1086 | TBD | 牛外周血白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1086P | TBD | 牛臟器組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1086Z | TBD | 牛腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1085 | TBD | 豚鼠外周血白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1085P | TBD | 豚鼠臟器組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1085Z | TBD | 豚鼠腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1090C | TBD | 雞外周血白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1090CP | TBD | 雞臟器組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1078H | TBD | 猴外周血白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1078HP | TBD | 猴臟器組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1078HZ | TBD | 猴腫瘤浸潤組織白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
WBC1110 | TBD | 豬外周血白細胞分離液試劑盒 | 100ml | 600 |
全血及組織稀釋液 100ml
細胞洗滌液 100ml
試劑 B 100ml
試劑 D 100ml
說明書 1 份
一,、,、、,、分離方法說明及圖例
A. 在 10ml 或 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 B,、D 兩種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);
B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#:2010C1119)1:1混合并小心加于D液之液面上,;或取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×108-1×109個/ml,,具體制備方法參照
“二、組織單細胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上,;
C. 以400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子),;
此時離心管中由上至下細胞分為五層。*層,;為血漿層或組織勻漿液層,。第二層,;為
富含胰島細胞的 D 液層。,。,。。第三層,;為單個核細胞層,。第四層;為透明 B 液層,。第五層,;為紅細胞層。收集第二層富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 富含胰島細胞的 D 液層放入含 4-5ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,,充分混勻后,,以 500g(約 1800 轉(zhuǎn)/分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起,。重復洗滌 2 次即得所需胰島細胞,。
注::::A. 提取率約為 80%。
注::::A.. .. 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,,,,,酶消化法由于各實驗室選取的消化 酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同,, 酶種類各不相同,,,,,請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗。,。,。。全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境,。,。。,。 剪碎法::::將組織塊放入平皿后,,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清,;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)
(另購)過濾到試管內(nèi),;離心沉淀 1500轉(zhuǎn)/分×3 min,,再用細胞洗滌液清洗 3次,,每次以 500rpm短時低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾去細胞團塊,。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(2~5)×107個/ml,。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109個/ml 的單細胞懸液備用,。
勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊,;放入 70ml 組織研磨器內(nèi),加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清,;緩慢轉(zhuǎn)動研棒,,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器,;收集細胞懸液,,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,,再用細胞洗滌液洗 3 次,,離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(2~5)×107個/ml,。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 個/ml 的單細胞懸液備用,。 細胞計數(shù)方法: 細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法,。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)進行。既可用于分離(散)細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,,也可用于
對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù),。不論計數(shù)的對象如何,均須制備分散的細胞懸液,。
1),、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。
2),、用玻璃虹吸管吸取細胞,,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,至
蓋玻片被液體充滿為止,。
3),、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,,
對于細胞團按單個細胞計數(shù),。
4)、按下式計數(shù)細胞懸液的密度:
細胞密度=(4 個大格細胞總數(shù)/4)×104個/ml×稀釋倍數(shù)
公式中乘以 104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:
1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3
而 1ml=1000mm3
細胞計數(shù)要點::::
A. 進行細胞計數(shù)時,,要求懸液中細胞數(shù)目不低于 104個/ml,,如果細胞數(shù)目很少要進行離
心再懸浮于少量培養(yǎng)液中,;顯微鏡下計數(shù)時,遇到 2 個以上細胞組成的細胞團,,應(yīng)按單個細胞計算,。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200 個/10mm2或>500 個/10 mm2 時,,說明稀釋不當,,需重新制備細胞懸液。
B. 要求細胞懸液中的細胞分散良好,,否則影響計數(shù)準確性,。
C. 取樣前充分混勻細胞懸液,尤其多次取樣更要注意每次取樣都要混勻,,以求計數(shù)準確,;
D. 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,,只按照一個細胞計算,。如果細
胞壓在格線上時,則只計上線,,不計下線,,只計左線,不計右線,。
E. 操作時,,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,,否則要重新計數(shù),。
初學者易犯的錯誤: 初學者易犯的錯誤:::
A. 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。
B. 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡,。
C. 滴入懸液時的量太多,,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。
三,、,、、,、注意事項
A. 本分離液是敏光型的,,運輸和貯藏過程中在 18℃-25℃避光保存,啟封后 4℃保存本品只能用于科學研究,,不能用于臨床檢測
避免微生物污染,。本品為真空包裝,未啟封前于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果,。
B. 待分離的血液及組織樣本要求新鮮,,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在
20℃水浴箱中復溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20℃±2℃時分離效果,,且
所有操作過程一定要在無菌條件下進行,。
C. 由于各品牌離心機的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季差異,,可能影響分離
效果,,用戶可調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)及離心時間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實驗室自定),。
D. 使用無靜電反應(yīng)的離心管,,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
E. *抗凝劑選擇:EDTA,、枸櫞酸,、肝素。注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積,。
F. 分離過程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550,、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及
紅細胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無菌,、無病毒、無支原體,、
低內(nèi)毒素水平且無細胞毒性,,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。
四,、、,、,、 產(chǎn)品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5...EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下
五、,、,、、 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限
18℃-25℃避光保存,,有效期兩年,。啟封后置 4℃保存,,有效期一周,。
注::::若保證無微生物污染,啟封后可置 4℃長期保存,。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果,。
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