運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

收到細胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）在顯微鏡下確認(rèn)細胞生長狀態(tài)時，hao在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準(zhǔn)確判斷細胞的傳代密度,?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4）貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。

5）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第yi次傳代建議1：2傳代。

細胞用途：僅供科研使用,。

本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備DMEM（推薦iCell-0001）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入2ml此細胞的*培養(yǎng)基終止消化。