維生素B1（Vitamin B1,，VB1）試劑盒說明書

分光光度法50管/48樣 注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 測定意義 維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分,，參與細胞代謝中的三羧酸循環(huán),，是維持機體正常代謝必須的水溶性維生素，在生物體能量代謝中有重要的作用,。 測定原理 VB1在堿性條件下,。。,。,。。,。與Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍,，在704nm有特征吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平,、研缽、離心機,、可見分光光度計,、恒溫水浴鍋,、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水,。 試劑組成和配制 提取液：液體35mL×1瓶,，4℃保存。 試劑一：液體1mL×1瓶,，4℃保存,。 試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存,。 試劑三：液體5mL×1瓶,，4℃避光保存。 試劑四：液體12mL×1瓶,，4℃保存,。 試劑五：液體6mL×1瓶，4℃避光保存,。 樣本處理
1. 組織：將樣品磨碎,，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液,，60℃浸提30min,，加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃,，13000g離心10min,，取上清測定（動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30分鐘）。
2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入0.6mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）,；加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃,，13000g離心10min,，取上清測定。
3. 血清：直接測定,。
測定操作
空白管
測定管
樣品（μL）
0.1
試劑一（μL）
100
試劑二（μL）
80
80
試劑三（μL）
100
100
充分混勻,，80℃反應(yīng)10min
提取液（μL）
80
80
試劑四（μL）
220
220
試劑五（μL）
120
120
H2O（μL）
300
300
充分混勻，靜置20min,，于1mL玻璃比色皿,，蒸餾水調(diào)零，測定704nm處吸光值,，記為A空白管和A測定管,，△A=A測定管-A空白管,。
計算公式 標準曲線：y = 0.1902x - 0.1833，R2 = 0.9991 1. 按照蛋白含量計算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反總÷（V樣×Cpr） = 52.58×（△A +0.1833）÷ Cpr 2. 按照樣本質(zhì)量計算 VB1含量（μg/g）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反總÷（V樣×W÷V樣總） = 52.58×（△A +0.1833）÷ W 3. 按照細胞數(shù)量計算 VB1含量（μg/104 cell）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總） = 52.58×（△A +0.1833）÷ 細胞數(shù)量 4. 按照液體體積計算 VB1含量（μg/mL）=（△A +0.1833）÷ 0.1902×V反總÷V樣 = 52.58×（△A +0.1833） V反總：反應(yīng)總體積,，1mL,；：V樣：加入樣本體積，0.1mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL； Cpr：蛋白濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g 注意事項
1. 若測定結(jié)果中吸光值超過1,，請將樣本稀釋后進行測定,，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2. 蛋白濃度較高的樣品,，比如動物組織,，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再測定,，在計算公式中乘以稀釋倍數(shù),。
3. 顯色完成后立即進行測定。