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180次O型口蹄疫抗體檢測試劑盒
使用說明書
【產(chǎn)品簡介】
口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗體檢測試劑盒用于檢測豬,、牛,、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗體,,用于評估口蹄疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用阻斷ELISA法,,在酶標板條微孔上預包被口蹄疫病毒抗原,。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有口蹄疫病毒抗原特異性抗體,,則與包被板上的抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標的抗VP1單抗,,樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合,;經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,,經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比,,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度OD值,。
【組份】
1 | 抗原預包被板條 | 1/2塊 | 6 | 終止液 | 6/11ml |
2 | 酶結(jié)合物 | 7/14ml | 7 | 陰性對照 | 0.25/0.5ml |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 50/100ml | 8 | 陽性對照 | 0.15/0.3ml |
4 | 顯色液 | 11/22ml | 9 | 封板膜 | 2/4張 |
5 | 說明書 | 1份 | 10 | 樣本稀釋液液 | 8ml |
【需自備的設備及試劑】
1. 微量移液器:10µl-100µl,、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸頭,。
3. 量筒:500ml,。
4. 96孔板酶標儀。
5. 蒸餾水或去離子水,。
6. 洗瓶或洗板機,。
【樣品制備】
取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,,要求血清清亮,,無溶血。
【洗滌液的準備】
濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,,如有鹽結(jié)晶,,搖動使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右,。
【注意事項】
1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,使用前應搖勻,,使用后放回2-8℃,。
2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,,使用試劑時應防止試劑污染,。
3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,,使用時應該注意防護。
4. TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑,。
5. 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,,并盡快置于2-8℃)。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染,。
7. 嚴格遵守操作說明可以獲得zui好的結(jié)果,。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確,。
8. 抗原包被板為一次性用品,,不得重復使用。
【操作步驟】
1. 每次試驗均設置陽性對照1孔,、陰性對照2孔,;
2. 將待檢板條按20ul/孔加入樣本稀釋液;
3. 將樣品和陰陽性對照品按20ul/孔加入孔內(nèi)(移液器槍頭請勿混用),;
4. 每孔加酶結(jié)合物60μl,,輕微振蕩混勻,蓋上封板膜,,置37℃溫育45分鐘,。
5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復4-6次,,zui后在干凈吸水紙上拍干,。
6. 每孔加顯色液100µl,,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
7. 每孔加終止液50μl,,使反應終止,,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果,。
【結(jié)果判定】
用酶標儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度OD值,。
試驗成立的條件是:
陰性對照(N)OD值>0.5、同時陽性對照(P)阻斷率>45%,;
計算方法:
PI (阻斷率)= 1 —(樣品OD值 ÷ 陰性OD均值)x100%
陰陽性判斷:
牛,、羊樣本
PI(阻斷率)>45%則判斷為陽性;
PI≤45%則判斷為陰性,。
【有效期】
貯存方法: 2 - 8ºC下貯存,。
有效期: 12個月。
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