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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司資料大小
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183次O型口蹄疫抗體檢測(cè)試劑盒
使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)豬,、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗體,,用于評(píng)估口蹄疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用阻斷ELISA法,,在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被口蹄疫病毒抗原,。在試驗(yàn)中,加入稀釋后的待檢血清,,經(jīng)過(guò)溫育后,,若樣品中含有口蹄疫病毒抗原特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,;再加入酶標(biāo)的抗VP1單抗,樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合,;經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號(hào)與樣本中的抗體含量成反比,,加入終止液終止反應(yīng)后,,用酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度OD值,。
【組份】
1 | 抗原預(yù)包被板條 | 1/2塊 | 6 | 終止液 | 6/11ml |
2 | 酶結(jié)合物 | 7/14ml | 7 | 陰性對(duì)照 | 0.25/0.5ml |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 50/100ml | 8 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 0.15/0.3ml |
4 | 顯色液 | 11/22ml | 9 | 封板膜 | 2/4張 |
5 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 10 | 樣本稀釋液液 | 8ml |
【需自備的設(shè)備及試劑】
1. 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl,。
2. 一次性移液器吸頭,。
3. 量筒:500ml。
4. 96孔板酶標(biāo)儀,。
5. 蒸餾水或去離子水,。
6. 洗瓶或洗板機(jī)。
【樣品制備】
取動(dòng)物全血,,按常規(guī)方法制備血清,,要求血清清亮,無(wú)溶血,。
【洗滌液的準(zhǔn)備】
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,,如有鹽結(jié)晶,搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋,。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
【注意事項(xiàng)】
1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,,使用前應(yīng)搖勻,,使用后放回2-8℃。
2. 不同品種,、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用,,使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
3. 底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性,,使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù),。
4. TMB(顯色液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,,并盡快置于2-8℃),。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7. 嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得zui好的結(jié)果,。操作過(guò)程中移液,、定時(shí)和洗滌等的全部過(guò)程必須精確。
8. 抗原包被板為一次性用品,,不得重復(fù)使用,。
【操作步驟】
1. 每次試驗(yàn)均設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照1孔、陰性對(duì)照2孔,;
2. 將待檢板條按20ul/孔加入樣本稀釋液,;
3. 將樣品和陰陽(yáng)性對(duì)照品按20ul/孔加入孔內(nèi)(移液器槍頭請(qǐng)勿混用);
4. 每孔加酶結(jié)合物60μl,輕微振蕩混勻,,蓋上封板膜,,置37℃溫育45分鐘。
5. 小心揭開(kāi)封板膜,,甩掉板孔中的溶液,,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,,以上步驟重復(fù)4-6次,,zui后在干凈吸水紙上拍干。
6. 每孔加顯色液100µl,,混勻,、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
7. 每孔加終止液50μl,,使反應(yīng)終止,,10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
【結(jié)果判定】
用酶標(biāo)儀于450nm(630nm作參比波長(zhǎng))讀取吸光度OD值,。
試驗(yàn)成立的條件是:
陰性對(duì)照(N)OD值>0.5,、同時(shí)陽(yáng)性對(duì)照(P)阻斷率>45%;
計(jì)算方法:
PI (阻斷率)= 1 —(樣品OD值 ÷ 陰性O(shè)D均值)x100%
陰陽(yáng)性判斷:
牛,、羊樣本
PI(阻斷率)>45%則判斷為陽(yáng)性,;
PI≤45%則判斷為陰性。
【有效期】
貯存方法: 2 - 8ºC下貯存,。
有效期: 12個(gè)月,。
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