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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司資料大小
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113次H2S 含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
可見分光光度法
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體50mL×1 瓶,,4℃保存。
試劑一:液體 25mL×1 瓶,,4℃保存,。
試劑二:液體 15mL×1 瓶,4℃保存,。
試劑三:液體 15mL×1 瓶,,4℃避光保存。
試劑四:液體15mL×1 瓶,,4℃保存,。
試劑五:液體 3mL×1 管,,4℃避光保存。
產(chǎn)品說(shuō)明:
H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子,,存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì),,生理濃度的 H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用,并對(duì)自發(fā)性高血壓,、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng),。
H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán),,亞甲基藍(lán)在 665nm處有大吸收峰,,通過測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量,。
需自備的儀器和用品:
天平,、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)1ml玻璃比色皿,、蒸餾水,。
操作步驟:
一、樣品處理:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,,然后 10000g,4℃離心 10min,,取上清,,置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌,、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液),,冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,,間隔 7秒,,總時(shí)間 3min);然后 10000g,,4℃,,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè),。
3. 血清(漿):直接測(cè)定,。
二、測(cè)定步驟: (取1.5ml離心管,,按照下表操作)
| 空白管 | 測(cè)定管 |
樣品(μL) |
| 250 |
H2O(μL) | 250 |
|
試劑一(μL) | 250 | 250 |
充分震蕩混勻 | ||
試劑二(μL) | 250 | 250 |
12000rpm,,4℃,離心 10min,,去上清,,留沉淀 | ||
H2O(μL) | 500 | 500 |
12000rpm,,4℃,離心 10min,,去上清,,留沉淀 | ||
試劑一(μL) | 250 | 250 |
試劑三(μL) | 250 | 250 |
充分震蕩混勻 | ||
試劑四(μL) | 250 | 250 |
12000rpm,4℃,,離心10min,,取上清 | ||
試劑五(μL) | 50 | 50 |
混勻,25℃靜置20min,,于微量石英比色皿/96孔板中,,空白管調(diào)零,測(cè)定665nm吸光值,,記為A665,。 |
三、H2S含量計(jì)算公式:
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y = 0.0044x,,R2 = 0.9988
(1)組織樣品
a.按照蛋白濃度計(jì)算
H2S(μmol/mg prot)= A665÷0.0044×V反總÷(V樣×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
b.按照樣本重量計(jì)算
H2S(μmol/g)= A665÷0.0044×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10-3 = 0.727×A665÷W
(2)液體樣本
H2S(μmol/L)= A665÷0.0044×V反總÷V樣= 727×A665
(3)細(xì)胞
H2S(μmol/104 cell)= A665÷0.0044×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè)))×10-3 =0.727×A665÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))
V反總:反應(yīng)總體積,,0.8mL;V樣:反應(yīng)中樣品體積,,0.25mL,;V樣總:加入提取液體積,1mL,;W:樣品質(zhì)量,,g;Cpr:蛋白濃度,,mg/mL,。
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