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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司資料大小
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219次四環(huán)素快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,,樣本中的殘留物四環(huán)素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗四環(huán)素抗體,加入酶標(biāo)記物后,,用TMB底物顯色,,樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物四環(huán)素的含量,。
二,、試劑盒特性
雞肉樣本:
四環(huán)素 ··········································· 0.4ppb
二jiaan四環(huán)素 ·································· 0.4ppb
吡四環(huán)素 ········································ 0.4ppb
金霉素 ········································ 0.4ppb
脫甲基金霉素 ································· 1.2ppb
土霉素 ·········································· 0.8ppb
強力霉素 ······································· 1ppb
蜂蜜樣本:
四環(huán)素 ·········································· 0.5ppb
二jia an四環(huán)素 ································· 0.5ppb
吡四環(huán)素 ······································ 0.5ppb
金霉素 ········································· 0.5ppb
脫甲基金霉素 ································ 1.5ppb
土霉素 ··········································· 1ppb
強力霉素 ········································ 1.2ppb
四環(huán)素 ·········································· 100%
二J a四環(huán)素 ································· 125%
吡四環(huán)素 ······································· 110%
金霉素 ··········································· 100%
脫甲基金霉素 ··································· 35%
土霉素 ············································ 58%
強力霉素 ········································· 45%
蜂蜜 ··········································· 85±20%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,,一板12條 |
| |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液(81ppb) | 1ml | 黑色帽 |
|
3 | 高濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ppb) | 1ml | 黑色帽 |
|
4 | 酶標(biāo)記物 | 7ml | 白色帽 | |
5 | 抗體工作液 | 7ml | 白色帽 | |
6 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 | |
7 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 | |
8 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 | |
9 | 20X濃縮洗滌液 | 15ml | 白色帽 | |
10 | 10X樣本提取液 | 50ml*2 | 透明帽 | |
11 | 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液 | 15ml*2 | 藍(lán)色帽 |
四,、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標(biāo)儀,、均質(zhì)器,、振蕩器,、離心機、刻度移液管,、天平(感量0.01g),、恒溫箱
微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl,、多道 30~300 µl
試 劑:甲醇
五,、樣本前處理步驟
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭,。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,,必要時可對實驗器具進行清潔,,以避免污染干擾實驗結(jié)果,。
配液1 樣本提取液A
用去離子水450ml與50ml 10X樣本提取液混勻或按9:1的比例按需配制(如10X樣本提取液有結(jié)晶,需溶解后在進行稀釋),。
配液2 樣本提取液B
取甲醇50ml與310ml樣本提取液A混勻或按5:31的比例按需配制,。
蜂蜜處理方法
1、 稱取1±0.05g均質(zhì)后的樣本于50ml離心管中,,加入10ml樣本提取液B(見配液2),,振蕩3min,室溫4000r/min以上,,離心5min,;
樣本稀釋倍數(shù): 10倍 六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
標(biāo)準(zhǔn)品6:50µl標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液(81ppb)用950µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液稀釋 4.05ppb
標(biāo)準(zhǔn)品5:600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品6混合 1.35ppb
標(biāo)準(zhǔn)品4:600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品5混合 0.45ppb
標(biāo)準(zhǔn)品3:600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品4混合 0.15ppb
標(biāo)準(zhǔn)品2:600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品3混合 0.05ppb
標(biāo)準(zhǔn)品1:標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液 0ppb
七,、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,,定量判定用第2種方法,。注意樣本吸光度值與其所含四環(huán)素量成負(fù)相關(guān)。
1,、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml),。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243,; 0.05ppb為1.816;0.15ppb為1.415,;0.45ppb為0.74,;1.35ppb為0.313;4.05ppb為0.155,。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb~4.05ppb,;樣本2的濃度范圍是0.15ppb~0.45ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實際濃度,。
2,、定量分析
(1)百分吸光率的計算,,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以DI一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),,以四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實際濃度,。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析,。(歡迎索?。?/span>
八、 注意事項
九,、儲藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,,不影響實驗結(jié)果,,請放心使用。
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