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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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分離液、分離液試劑盒
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四環(huán)素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2019-11-29閱讀:220
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四環(huán)素快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

一,、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,,樣本中的殘留物四環(huán)素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗四環(huán)素抗體,,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,,樣本吸光值與其所含殘留物四環(huán)素的含量成負(fù)相關(guān),,與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物四環(huán)素的含量。

二,、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:  0.05ppb
  • 孵育溫度:      25
  • 孵育時(shí)間:      30min15min
  • 樣本檢測(cè)下限

雞肉樣本:

四環(huán)素 ···········································  0.4ppb

jiaan四環(huán)素 ··································  0.4ppb

吡四環(huán)素 ········································  0.4ppb

金霉素   ········································  0.4ppb

脫甲基金霉素 ·································  1.2ppb

土霉素 ··········································  0.8ppb

強(qiáng)力霉素 ·······································   1ppb

蜂蜜樣本:

四環(huán)素 ··········································  0.5ppb

jia an四環(huán)素 ·································  0.5ppb

吡四環(huán)素 ······································   0.5ppb

金霉素 ·········································   0.5ppb

脫甲基金霉素 ································   1.5ppb

土霉素 ···········································   1ppb

強(qiáng)力霉素 ········································  1.2ppb

  • 交叉反應(yīng)率

四環(huán)素 ··········································  100%

J a四環(huán)素 ·································  125%

吡四環(huán)素  ·······································   110%

金霉素  ···········································  100%

脫甲基金霉素 ···································   35%

土霉素  ············································  58%

強(qiáng)力霉素  ·········································  45%

  • 樣本回收率

蜂蜜 ···········································  85±20%

三,、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條8孔,一板12條

 

2

標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液(81ppb

1ml

色帽

 

3

高濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ppb

1ml

色帽

 

4

酶標(biāo)記物

7ml

白色帽

5

抗體工作液

7ml

白色

6

底物A液

7ml

白色帽

7

底物B液

7ml

黑色帽

8

終止液

7ml

黃色帽

9

20X濃縮洗滌液

15ml

白色帽

10

10X樣本提取液

50ml*2

透明帽

11

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液

15ml*2

藍(lán)色帽

四,、所用儀器,、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器,、振蕩器,、離心機(jī)、刻度移液管,、天平(感量0.01g),、恒溫箱

微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20200µl、單道1001000µl,、多道 30300 µl

      劑:甲醇

五,、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭,。

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1  樣本提取A

去離子水450ml與50ml 10X樣本提取液混勻或按9:1的比例按需配制(10X樣本提取液有結(jié)晶,,需溶解后在進(jìn)行稀釋,。                                      

配液2  樣本提取B

取甲醇50ml與310ml樣本提取液A混勻或按5:31的比例按需配制。

  • 樣本處理                  

蜂蜜處理方法

1,、 稱取1±0.05g質(zhì)后的樣本于50ml離心管中,,加入10ml樣本提取液B(見(jiàn)配液2),振蕩3min,,室溫4000r/min以上,,離心5min 

  • 50 µl上清液用于分析

樣本稀釋倍數(shù): 10                        六,、 酶標(biāo)免疫分析程序:

  • 測(cè)定前應(yīng)須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025),。
  • 使用之后立即將所有試劑放回28
  • ELISA分析中的再現(xiàn)性,,很大程度上取決于洗板的一致性,,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
  • 所有恒溫孵育過(guò)程,,避免光線照射,,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,,室溫(2025)平衡30min以上,,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 配制標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)650µl標(biāo)準(zhǔn)濃縮液81ppb950µl標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溶液稀釋    4.05ppb

標(biāo)準(zhǔn)5600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品6混合                1.35ppb

標(biāo)準(zhǔn)4600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品5混合                0.45ppb

標(biāo)準(zhǔn)3600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品4混合                0.15ppb

標(biāo)準(zhǔn)2600µl標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液與300µl標(biāo)準(zhǔn)品3混合                0.05ppb

標(biāo)準(zhǔn)1標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶液         0ppb                                         

  • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,,將不用的微孔放入自封袋,,保存于2-8
  • 配液:將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),,或按所需用量配制洗滌液,。
  • 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。
  • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加加入酶標(biāo)記物50µl/再加入抗體工作液50µl/孔,,用蓋板膜封板,,輕輕振蕩混勻。25環(huán)境中反應(yīng)30min,。
  • 將孔內(nèi)液體甩干,,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破),。
  • 顯色:加入底物A50µl/孔,,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,,25環(huán)境中避光顯色15min,。
  • 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),,5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值,。

七,、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,,定量判定用第2種方法,。注意樣本吸光度值與其所含四環(huán)素量成負(fù)相關(guān)。

1,、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,,樣本2的吸光度值為1.0,,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243 0.05ppb1.816,;0.15ppb1.415,;0.45ppb0.741.35ppb0.313,;4.05ppb0.155,。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb4.05ppb;樣本2的濃度范圍是0.15ppb0.45ppb,,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實(shí)際濃度,。

2、定量分析

1)百分吸光率的計(jì)算,,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以DI一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),,以四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中四環(huán)素實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,,更便于大量樣本的準(zhǔn)確,、快速分析,。(歡迎索取)

八,、 注意事項(xiàng)

  • 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低,。
  • 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,,重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
  • 混合要均勻,,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。
  • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚,。
  • 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒,;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化,;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑,。
  • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,,因此要避免直接暴露在光線下,。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之,。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),,表示試劑可能變質(zhì)。
  • 該試劑盒zui佳反應(yīng)溫度為25℃,,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化,。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

  • 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8保存,,不要冷凍,。
  •  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒,。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,請(qǐng)放心使用,。

慶大霉素檢測(cè)條

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