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伏安酶聯(lián)免疫分析法在其他方面的應(yīng)用
乙型肝炎病毒抗原抗體的測定,,病毒性肝炎主要包括甲型(HAV)乙性(HBV)和非甲非乙型三種,,其中以乙型肝炎的危害性zui大。這是因為機(jī)體在感染了乙型肝炎病毒后,,除急性表現(xiàn)外,,尚有相當(dāng)一部分轉(zhuǎn)化為慢性肝炎、無癥狀帶病毒者,,其中一部分會將發(fā)展為肝硬化,,甚至肝癌,導(dǎo)致死亡,。因此對乙型肝炎的防治和尋找早期靈敏的診斷方法將很受關(guān)注,。目前常用的分析方法有放射免疫分析法和ELISA法等。兩個伏安酶聯(lián)免疫分析體系應(yīng)用于人血清中乙型肝炎病毒多種抗原抗體的電化學(xué)測定,,取得了令人滿意的結(jié)果,。
(1) ODA-H2O2-HRP伏安酶聯(lián)免疫分析體系,采用雙抗體夾心法測定乙型肝炎表面抗原(HBsAg)測得線性范圍為1:1~1:384,,檢測限為1:384,,靈敏度是ELISA分光光度法的16倍。
采用雙抗原夾心法測定乙型肝炎表面抗體(HBsAb),測得線性范圍為1:1~1:256,,檢測限為1:256,,靈敏度是ELISA分光光度法的2倍,。
乙型肝炎核心抗體(HBcAb)測定是采用異相競爭法進(jìn)行的,測定得到的線性范圍是1:1~1:512,,檢測限為1:512,,靈敏度是ELISA分光光度法的2倍。
乙型肝炎E抗原(HBeAg)的測定方法同HBsAb,。測定得到的線性范圍是1:1~1:1024,,檢測限為1:1024,靈敏度可達(dá)ELISA分光光度法的16倍,。
乙型肝炎E抗體(HBeAb)的測定是乙型肝炎診斷的一項重要指標(biāo),,采用競爭性抑制免疫反應(yīng)對其進(jìn)行測定。實驗結(jié)果,,測得線性范圍為1:1~1:384,,檢測限為1:384,靈敏度是ELISA分光光度法的,4倍,。
同時,,以ODA-H2O2-HRP伏安酶聯(lián)免疫分析體系對10份人血清樣品進(jìn)行了測定,測定結(jié)果與ELISA分光光度法進(jìn)行對照,,結(jié)果*一致,,兩者具有很好的相關(guān)性。
(2) OT-H2 O2-HRP伏安酶聯(lián)免疫分析體系,乙型肝炎病毒5種抗原抗體的測定方法同ODA-H2O2-HRP體系,,按照實驗方法對HBsAg,、HBsAb 、HBcAb,、HBeAg和 HBeAb進(jìn)行測定,,所得的線性范圍分別為 1:1~1:512、1:1:~1:1024,、1:1~1:1024,、1:1~1:1024和1:1~1:1536,對應(yīng)的檢測限分別為1:512,、1:1024,、1:1024、1:1024和1:1536,,靈敏度分別是ELISA分光光度法的16倍,、8倍、2倍,、16倍和16倍,。對人血清樣品分析的結(jié)果也與ODA-H2O2-HRP體系所測得結(jié)果*一致。
人血清鐵蛋白的測定
人血清鐵蛋白的測定(Ferritin)為一儲存及利用鐵的蛋白質(zhì),主要儲存于網(wǎng)狀肉皮系統(tǒng)及骨髓中,。人鐵蛋白微量存在于血清中,,但血清鐵蛋白濃度的水平及其變化可以反映體內(nèi)的鐵儲備,鐵蛋白的測定是缺鐵性貧血及肝癌的一項重要指標(biāo),。因而較廣泛地用于臨床某些血液疾病的診斷及鑒別診斷,。目前臨床檢測中測定鐵蛋白的常用方法有間接血凝試驗,、雙擴(kuò)散及ELISA等方法,。OAP-H2O2-HRP、MAP-H2O2-HRP,、PAP-H2O2-HRP等伏安酶聯(lián)免疫分析測定人血清中鐵蛋白的新方法,。該方法以線性掃描二階導(dǎo)數(shù)伏安法檢測HRP催化H2O2氧化電化學(xué)底物的產(chǎn)物,采用雙抗體夾心免疫分析法對鐵蛋白進(jìn)行測定,,靈敏度高于經(jīng)典的ELISA分光光度法,。三個體系對鐵蛋白測定的線性范圍分別為0.2~320ng/ML、0.25~320 ng/ML,、和0.2~320 ng/ML,。用所建立的方法對人血清樣品進(jìn)行測定,并與現(xiàn)行的ELISA分光光度法進(jìn)行對照,,二者相關(guān)性好,。
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