小鼠白三烯B4（LTB4）ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定小鼠血清,，血漿及相關液體樣本中白三烯 B4（LTB4）含量,。提供免費代檢測服務,。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白三烯 B4（LTB4）水平。用純化的小鼠白
三烯 B4（LTB4）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入白三烯 B4
（LTB4），再與 HRP 標記的白三烯 B4（LTB4）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，
經過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下
轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白三烯 B4（LTB4）呈正相關,。用酶標儀在 450nm
波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠白三烯 B4（LTB4）濃度。
試劑盒組成：
試劑盒組成 48 孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2 片（48） 2片（96）
密封袋 1個 1個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品：225ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑 A 液 3ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑 B 液 3ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
20倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 30ml×1 瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求：
1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,，離心 20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應再次離心,。
2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后,，
離心20 分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再
次離心。
3.尿液：用無菌管收集,，離心 20 分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中
如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/
分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃
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度達到 100 萬/ml 左右,。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘
左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。
5.組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的 PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將
標本勻漿充分。離心 20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，
其余冷凍備用,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10孔,，在*、第二孔中分別加標
準品 100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻,；然后從*孔,、第二
孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,，再各取 50μl 分別加到第五,、第六孔
中，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各
取 50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,，混
勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準
品稀釋液 50μl,，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl,，
濃度分別為 150ng/L,，100ng/L ，50ng/L,，25ng/L,， 12.5ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣
品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品 10μl（樣
品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30分鐘,。
4. 配液：將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用,。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復 5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止
液后 15分鐘以內進行,。
注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
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8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的 OD
值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋
倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值
代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值為 0.990以上。
2.批內與批見應分別小于 9%和 11%
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6 個月