EA02A\00                     2016-01版

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To

Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus（PRRSV Ab）,ELISA

【規(guī)格】

96T×2/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬藍(lán)耳病毒抗體,，可用于評估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬藍(lán)耳病毒疫苗免疫狀況分析。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理,，由包被有高純度的豬藍(lán)耳病毒抗原的微孔反應(yīng)板,、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合,，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物,，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色,。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比,，當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后，經(jīng)酶標(biāo)儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性,，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在,。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標(biāo)儀，雙波長450/630nm濾光片

2．微量移液器（單道1-100ul,、0.5-10ul,、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．一次性槍頭（10ul，200ul）

6．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清,，樣本應(yīng)無菌采集,，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過一周，長期應(yīng)在-20℃以下保存,。

2．避免使用嚴(yán)重溶血,、有沉淀物,、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,，先取出置室溫30min,，可以獲得jia結(jié)果。.

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋,，稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果,。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可,。

【檢驗(yàn)方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量,，取所需板條，檢測時,，設(shè)陰,、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰,、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中（可不設(shè)空白對照）,。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗(yàn)）,。

2．溫育：加樣后,，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘,。

3．洗板：甩去孔內(nèi)液體,，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，靜置10s左右,，直接甩出,，洗滌3次，后一次洗滌后拍干板內(nèi)液體,。

4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl,。

5．溫育：加好酶標(biāo)記物后蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘,。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl,，振蕩混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl,，振蕩10秒,，充分混勻,，終止后即讀數(shù)。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測,，讀取各孔吸光度值（OD值）,。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6,，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15,；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定,，S/P值計算時按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—)),，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值,；

當(dāng)樣本的S/P≥0. 2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性,；

若進(jìn)行大量樣本檢測時,，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)結(jié)果，該軟件可登陸本公司*網(wǎng)站下載,。

【注意事項(xiàng)】

1．本試劑盒僅供研究使用,。

2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用,。

3．使用試劑盒之前,，一定要仔細(xì)閱讀說明書。

4．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待,，試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

5．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開,，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存,。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存,。

6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

7．加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢,，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染,。

8．終止液有腐蝕性,，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈,。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍,，有效期12個月,。

【生產(chǎn)日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒,。

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