EA02A\00                     2016-01版

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書

【產品名稱】

通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To

Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus（PRRSV Ab）,ELISA

【規(guī)格】

96T×2/盒

【預期用途】

本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬藍耳病毒抗體，可用于評估感染豬的血清學診斷以及豬藍耳病毒疫苗免疫狀況分析,。

【檢驗原理】

本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理,，由包被有高純度的豬藍耳病毒抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成,。其反應機理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結合,，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標抗豬IgG抗體”復合物，加入顯色劑,，通過酶催化反應顯色,。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后,，經酶標儀檢測所得結果超過設定的臨界值時結果判為陽性,，即表明免疫產生了抗體或有自然感染存在。

【主要組成成份】

【自備器材】

1．酶標儀,，雙波長450/630nm濾光片

2．微量移液器（單道1-100ul,、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．一次性槍頭（10ul,，200ul）

6．去離子水

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清,，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周,，長期應在-20℃以下保存,。

2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物,、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本,。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min,，可以獲得jia結果,。.

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋，稀釋的樣本混合均勻能取得較好結果,。

3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）,。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶,，屬正常現(xiàn)象,，放置37℃至溶解后即可,。

【檢驗方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條,，檢測時,，設陰、陽性對照各2孔,，分別加入不用稀釋的陰,、陽性對照血清100μl于相應孔中（可不設空白對照）。其余為樣本孔,，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）,。

2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜,，置37℃溫育30分鐘,。

3．洗板：甩去孔內液體，用洗滌液注滿反應板孔,，靜置10s左右,，直接甩出，洗滌3次,，后一次洗滌后拍干板內液體,。

4．加酶：每孔加酶標記物100μl。

5．溫育：加好酶標記物后蓋上蓋板膜,，置37℃溫育30分鐘,。

6．洗板：同步驟3。

7．顯色：每孔加顯色劑100μl,，振蕩混勻,，37℃避光反應10分鐘。

8．終止：每孔加終止液50μl,，振蕩10秒,，充分混勻，終止后即讀數(shù),。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測,，讀取各孔吸光度值（OD值）。

【結果判定】

在酶標儀上測各孔的OD值,。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6,，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否,，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定,，S/P值計算時按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—)),，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD_450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD_450/630值,；

當樣本的S/P≥0. 2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性,；

若進行大量樣本檢測時,，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進行分析數(shù)據(jù)結果，該軟件可登陸本公司*網(wǎng)站下載,。

【注意事項】

1．本試劑盒僅供研究使用,。

2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用,。

3．使用試劑盒之前,，一定要仔細閱讀說明書。

4．本試劑盒應按含有傳染性材料對待,，試驗廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

5．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開,，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存,。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存,。

6．應用微量移液器加入樣本及試劑,，并經常校對其準確性。

7．加洗滌液時應做到滿而不溢,，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染,。

8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈,。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存,，防止冷凍，有效期12個月,。

【生產日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒,。

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