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人靜脈內(nèi)皮細胞(HUV-EC)培養(yǎng)說明書
貨號:HCCL-004
細胞介紹
該細胞來源于人靜脈內(nèi)皮,,可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆,,在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。
細胞特性
1) 來源:人靜脈內(nèi)皮
2) 形態(tài):內(nèi)皮細胞
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,,可在1000RPM,,常溫條件下,離心5min后,,于潔凈操作臺棄去上清,,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,,再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途:僅供科研使用,。
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基(F-12K:SIGMA,貨號N3520, 添加0.1 mg/ml 肝素; 0.03-0.05 mg/ml 內(nèi)皮細胞生長因子),,90%;胎牛血清,,10%,。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進行凍存。
注意事項:
1. 收到細胞后,,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,,請立即與我們聯(lián)系,。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,,并請注意防護,,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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