測試農(nóng)藥殘留有哪些方法
一,、農(nóng)藥分類
農(nóng)藥是用于防治危害農(nóng)作物及農(nóng)副產(chǎn)品的病蟲害、雜草及其他有害生物的化學(xué)藥劑的統(tǒng)稱,。其分類方法有多種,,常見的幾種分類如下:
1、根據(jù)防治對象的不同,,分為殺蟲劑,、殺螨劑、殺菌劑,、除草劑,、殺鼠劑等。常將防治害蟲的稱為殺蟲劑,,防治紅蜘蛛的稱為殺螨劑,,防治作物真菌、細(xì)菌及病毒的稱為殺菌劑,,防治雜草的稱為除草劑,,防治鼠類的稱為殺鼠劑。
2,、根據(jù)農(nóng)藥的作用方式分為胃毒劑,、觸殺劑、熏蒸劑,、內(nèi)吸劑,、引誘劑、驅(qū)避劑,、拒食劑,、不育劑等。
3,、根據(jù)農(nóng)藥的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)可分為有機(jī)農(nóng)藥和無機(jī)農(nóng)藥兩大類,。農(nóng)藥中除少部分的無機(jī)物外,大部分都為有機(jī)化合物,,其中有元素有機(jī)化合物,、金屬有機(jī)化合物及一般有機(jī)化合物之分。我們所測試的有機(jī)磷屬于元素有機(jī)化合物之類,。
另外還有根據(jù)農(nóng)藥的來源,、農(nóng)藥的使用方法、防治原理等來分類,。
二,、生化分析適用于什么農(nóng)藥
絕大多數(shù)化學(xué)農(nóng)藥之所以能殺蟲、螨,、或者有效的主要原因就在于它們對生物內(nèi)的靶酶有不同程度的抑制作用,。因此,,利用生化分析測試的農(nóng)藥應(yīng)該是生物體內(nèi)某種酶的抑制劑(激活劑),使得這些酶失去正常的生理作用,,從而使生物表現(xiàn)出中毒的癥狀,。當(dāng)然,基于目前的研究水平,,有些農(nóng)藥雖然知道它對某種酶有不利的影響,,但是該酶的提取,保存等因素的原因也制約著用生化方法來測試該種農(nóng)藥,。所以雖然生物體內(nèi)酶的種類很多,,化學(xué)農(nóng)藥作用原理也大多基于對生物體內(nèi)酶的作用,但利用生化分析的農(nóng)藥種類并不多,。
三,、測試農(nóng)藥殘留有哪些方法
農(nóng)藥殘留的測試方法,總的來說可以分為常規(guī)測試方法和速測方法,。常規(guī)的測試方法有氣象色譜,、凝膠色譜及薄層色譜法。這些方法都是利用農(nóng)藥在不同載體中的分配系數(shù)不同而得到分離,,從而定性和定量來測試農(nóng)藥的種類及含量,。速測方法主要有速測卡法和酶抑制率法兩種。無論是速測卡法還是酶抑制率法,,其都是利用酶活性被抑制原理,。
四、乙酰膽堿酯酶對乙酰膽堿的作用原理
乙酰膽堿酯酶和乙酰膽堿作用時,,首先形成一個酶底物的絡(luò)合物,,接著乙酰膽堿上的酰基轉(zhuǎn)移到酶分子上,形成乙?;ッ?。乙酰化酯酶很不穩(wěn)定,,極易水解,,其半衰期約為0.1毫秒。乙?;ッ杆夂笥轴尫懦雒阜肿樱瑥亩姑笍?fù)活,,再循環(huán)利用,。
五、有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制過程,,什么是可逆抑制
有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥是乙酰膽堿酯酶的底物膽堿酯的結(jié)構(gòu)類似物,。它們同乙酰膽堿酯酶作用時,,首先形成非共價的中間復(fù)合物,然后被水解,,水解的同時,,磷酰基與膽堿酯酶活性中心絲氨酸羥基作用生成以共價結(jié)合的磷?;?。磷酰化酶中的磷?;茈y水解,,所以磷酰化酶很穩(wěn)定,,其穩(wěn)定性是乙?;傅?07倍以上。因此,,可以說有機(jī)磷對乙酰膽堿酯酶的抑制是不可逆的,。不可逆抑制是指抑制劑與酶分子上的某些基團(tuán)以牢固的共價鍵結(jié)合使酶失活,它的特點是隨時間的延長會逐漸的增加抑制,,后達(dá)到*抑制,。而可逆抑制是指抑制劑與酶分子結(jié)合是可逆的,不會產(chǎn)生不可逆的共價修飾等作用,。
六,、米氏常數(shù)的含義
米氏常數(shù)km表示酶與底物的復(fù)合物的離解常數(shù),每一種酶對于特定的底物,,都有自己特定的km,。1/km稱為酶與底物結(jié)合的親和常數(shù)。米氏常數(shù)也可以定量為在一定的酶濃度下,,酶觸反應(yīng)速度為大反應(yīng)速度一半時底物的濃度,。
七、預(yù)反應(yīng)過程中,,影響農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率的因素
農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率的大小主要取決于農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu),。當(dāng)農(nóng)藥分子中含有起作用的強(qiáng)吸電子基團(tuán)時,磷?;c乙酰膽堿酯酶的絲氨酸羥基就愈容易結(jié)合,,在一定時間內(nèi),抑制率就愈大,。當(dāng)然,,對于一定的農(nóng)藥,在預(yù)反應(yīng)中,,抑制環(huán)境溫度和抑制時間及農(nóng)藥濃度等都是影響抑制率大小的因素,。所以在預(yù)反應(yīng)中,,應(yīng)盡可能地保證環(huán)境溫度、抑制時間以及農(nóng)藥濃度的一致,。有些農(nóng)藥剛配制好時測試的抑制率較大,,幾天后同樣農(nóng)藥同樣條件再測試時可能抑制率又降低,這就是因為部分農(nóng)藥已經(jīng)降解,,起不到抑制作用所致,。
八、預(yù)反應(yīng)結(jié)束后,,影響抑制率測定的因素
酶抑制率法測試農(nóng)藥殘留的過程中,,預(yù)反應(yīng)完成后,再加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng),。測試根據(jù)為體系中顏色變化的情況來決定抑制率的大小,。所以在測試一批待測樣時,加入底物和上機(jī)測試的過程應(yīng)盡量快,,且加入底物的量一定要一致,,也不得有任何溶液的損失,否則測出的數(shù)據(jù)時不可靠的,。
九,、試樣提取中應(yīng)該注意些什么
有些果蔬如蔥、蒜,、蘿卜,、韭菜、芹菜,、香菜,、茭白、蘑菇,、番茄等中含有對酶有影響的植物次生質(zhì),,有些蔬菜中葉綠素的含量太高,影響比色反應(yīng),。所以對于以上種類的果蔬,,應(yīng)盡可能的采取整株(體)浸提的辦法來消除干擾。另外,,由于同一株(個)待測樣品,,其不同部位的農(nóng)藥含量不同,因此,,進(jìn)行重復(fù)性測試時,,好為同一個待測液的不同次數(shù)測定,否則可能會出現(xiàn)因取樣不同出現(xiàn)重現(xiàn)性不好的情況。
十,、藥劑應(yīng)怎樣保存
酶抑制率測試法所用的試劑大多為生化試劑,因此它們的保存條件較為苛刻,。對于粉劑化的酶及底物應(yīng)保存在-20℃環(huán)境中,。對于已經(jīng)配制成溶液的藥劑如酶液、底物溶液,、顯色劑溶液等應(yīng)置于0-4℃環(huán)境中保存,。而浸提劑無論配制成溶液與否,在常下密封保存即可,。
十一,、國家對農(nóng)藥殘留速測有哪些指標(biāo),其測試方法有哪幾類
目前國家對農(nóng)藥殘留速測出臺的標(biāo)準(zhǔn)有《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)》和《中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》兩個標(biāo)準(zhǔn),。這兩個標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測試結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)及以及常見農(nóng)藥如甲胺磷,、氧化樂果、克百威,、敵敵畏等農(nóng)藥的低檢出限,。不同的標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)所用酶的種類及方法,,規(guī)定的各種農(nóng)藥的檢出*和判斷標(biāo)準(zhǔn)也不同,。例如,農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)判斷依據(jù)為抑制率大于70%時不合格,,而國標(biāo)有規(guī)定抑制率大于50%為不合格,,有規(guī)定吸光度值大于0.9為不合格。兩種標(biāo)準(zhǔn)所使用的方法都是利用酶被農(nóng)藥抑制,,活性降低原理,。其中國家標(biāo)準(zhǔn)中,有使用乙酰膽堿酯酶,,也有使用植物酯酶—面粉酶,,而行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)則使用的是丁酰膽堿酯酶。
十二,、本殘留儀的主要特點有哪些
1.強(qiáng)大的測試功能:具有生化分析和理化分析兩種功能,,從其測試項目來看,它既能測農(nóng)殘,,還能測試重金屬和亞硝酸鹽,,土壤各種養(yǎng)分。
2. 適應(yīng)多種測試方法:可以適于國家標(biāo)準(zhǔn),、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),、地方標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)定的各種不同的測試方法,如酶抑制法、酶抑制率法,、吸光度法,,動力學(xué)法或終止反應(yīng)法。
3.完備的測試條件保證:生化分析受溫度影響極大,,要求在恒溫下進(jìn)行預(yù)反應(yīng),,.本殘留儀從功能上來看,它不但具有測試功能,,而且還有恒溫水浴,,定時等功能。保證預(yù)反應(yīng)條件,、提高度,;另外,使用本儀器很方便,,不用調(diào)整波長,,只需按鍵就能選擇自己所需的測試波長。
4.靈活可任意設(shè)置的用戶平臺:本儀器的有關(guān)測試參數(shù)可以根據(jù)用戶選用的酶源,、方法和標(biāo)準(zhǔn)或者所測試的蔬菜種類等客觀要求來自行設(shè)置,。該儀器是目前國內(nèi)*兼具科學(xué)實驗功能的且適應(yīng)性寬農(nóng)藥殘留速測儀。
5.測試通道多,,測試效率高:結(jié)果不用人工計算,,儀器自動判斷一目了然。
2011年8月1日