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【原理】

本試劑采用ELISA方法用于犬糞便中包蟲抗原的檢測。

【試劑組成】

1.預(yù)包被板	48T/96T;	7. 樣本稀釋液（5號液）	1支;
2.酶結(jié)合物（1號液）	1支;	8. 終止液（6號液）	1支;
3.濃縮洗滌液（2號液）	1支;	9. 陽性對照品	1支;
4.底物（3號液）	1支;	10.陰性對照品	1支;
5.顯色劑（4號液）	1支;	11.不干膠膜	1/2片;
6.2X濃縮糞便處理液（7號液,，用前以蒸餾水等體積稀釋）	1支;	12.自封袋	1個;
6.2X濃縮糞便處理液（7號液,，用前以蒸餾水等體積稀釋）	1支;	13.使用說明書	1份

【操作程序】

1. 樣品處理犬糞樣品需要預(yù)先低溫（-70℃以下）冷凍7天以上,，以滅活蟲卵。稱取1克犬糞,加入1ml已稀釋的糞便處理液,，充分?jǐn)嚢杌靹?，靜置10分鐘，再經(jīng)5000rpm離心30分鐘,，取上清液檢驗(yàn),。

2. 洗滌液配制用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋，如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液,。

3. 加樣反應(yīng) 每次試驗(yàn)設(shè)陰性對照2孔,、陽性及空白對照各1孔；其中陰,、陽對照孔分別加入陰性,、陽性對照各100ul，空白對照孔加入樣品稀釋液（5號液）2滴,。其它各樣本檢測孔先滴加樣品稀釋液（5號液）各1滴,，再取犬糞上清液50ul加入板孔中。37℃下避光反應(yīng)30分鐘,，甩去孔內(nèi)液體,。用已稀釋的洗滌液洗滌4次，每次靜止1分鐘,，拍干,。

4. 加酶反應(yīng) 除空白孔外，各孔加酶結(jié)合物2滴,。37℃下避光反應(yīng)30分鐘,，甩去孔內(nèi)液體。用已稀釋的洗滌液洗滌3次,，每次靜止1分鐘,，拍干,。

5. 顯色反應(yīng) 加底物液（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻,，37℃避光顯色10分鐘,。加終止液（6號液）1滴，終止反應(yīng)（加終止液后,，藍(lán)色會變?yōu)辄S色）并判讀結(jié)果,。

【結(jié)果判斷】

陰性對照呈無色或淺黃色，陽性對照呈明顯黃色,，表示試驗(yàn)有效,。

以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度（A值）,。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的3.1倍者判為陽性,。如陰性對照A值的平均值低于0.10時按0.10計算。

【注意事項】

1.試劑盒于2-8℃保存,，有效期12個月,。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

2.未使用完的板條應(yīng)密封保存,。

3.試劑盒中終止液具有腐蝕性,，要小心使用。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊,，各瓶蓋之間不可混用,。不同批號試劑盒的試劑組分不可混用。

5.應(yīng)采集新鮮的犬糞樣本進(jìn)行測試,。若不能及時檢測,，應(yīng)將糞樣放置低溫凍存，防止腐敗或反復(fù)凍融,。如犬糞難以溶解,，應(yīng)適當(dāng)搗碎處理。任何樣本都應(yīng)作為傳染源來處理,。

6.37℃孵育時,，建議使用水浴箱。如無條件,，可使用濕盒放入溫箱并同時用不干膠膜封蓋板孔,。

7.濃縮洗滌液及濃縮糞便處理液若出現(xiàn)結(jié)晶時，應(yīng)置37℃至溶解,。

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