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WSU-HN30人口腔鱗狀細(xì)胞
細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)
一,、細(xì)胞培養(yǎng)條件
細(xì)胞英文名稱 | WSU-HN30 | 細(xì)胞中文名稱 | 人口腔鱗狀細(xì)胞 |
形態(tài)特性 | 上皮樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
培養(yǎng)體系 | DMEM+10%FBS | ||
傳代方法 | 1:2--1:4傳代 | 傳代情況 | 2~3天1次 |
凍存條件 | 細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液 | ||
備注 | 收集瓶中培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng),。 | ||
二,、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)?/span>辦法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,，先打開(kāi)外包裝,，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作,，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí),。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,，加入6ml*培養(yǎng)基,，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng),；超過(guò)80%匯合度時(shí),，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基）
三,、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1,、對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后,，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng),，視情況傳代或者凍存,。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）,。
