HPT-8 細胞,,人飼養(yǎng)層上皮細胞
培養(yǎng)條件:*培養(yǎng)基: DMEM高糖90%+10%胎牛血清
培養(yǎng)條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
HPT-8 細胞,人飼養(yǎng)層上皮細胞
傳代方法:
收到細胞后,,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,。
(一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),,嚴(yán)格無菌操作,,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),。
(二)如果細胞已長滿,,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,,用PBS(不含鈣,,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓分散,,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細胞隨即脫落下來,。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中,。一傳二,。
注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,,以免細胞不適應(yīng)而造
成生長不好,。
凍存方法: 凍存液:95%*培養(yǎng)液,5%DMSO
儲存:液氮儲存