徠卡倒置顯微鏡的掃描電鏡

徠卡倒置顯微鏡所有的掃描探針顯微鏡都具有某些共同特點。所有的儀器都有一個探針和一個觀測表面,。兩者相距十分近,。徠卡體視顯微鏡通過某種壓電裝置,，使兩者相對掃描。為檢測探針與表面的相互作用,，還需要一個電路裝置,。這便是掃描探針顯微鏡的大致結(jié)構(gòu)，而探針與表面相互作用的性質(zhì)便決定了掃描探針顯微鏡的類型,。

徠卡倒置顯微鏡由于高分辨掃描電鏡的間世,，為用表面標記技術(shù)觀察細胞表面形態(tài)和區(qū)別兩類紉胞群與其表面形態(tài)相的機能提供了條件。用此技術(shù)方法可研究細胞表面抗原,、受體的性質(zhì),，分布及運動。在原則上，透射電鎊與熒光顯微鏡用的免疫標記技術(shù)也適用于免疫掃描電子顯微術(shù),。但由于徠卡倒置顯微鏡掃描電鏡與透射電鏡的成像原理不同,，因此對免疫掃描電境術(shù)的標記物有些特殊要求。這些要求是：

1．清晰,、容易識別的形狀‘對透射電鏡的標記物要求電子致密度高,，掃描電鏡的標記物電子密度不是重要問題，而形狀是識別的重要因素,。

2．大小適宜：一般而言掃描電鏡分辨率低于透射電鏡,，此外掃描電鏡標本要金屑鍍膜，這都影響樣品表面結(jié)構(gòu)的分辨,。因此標記物若太小,、結(jié)構(gòu)過于微細，就不能與樣品表面固有結(jié)構(gòu)區(qū)別,，但標記物過于大，又不能明確定出去面抗原位置,，因此標記物大小要兼顧以上兩方面,。

3.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在標本處理過程中不會被損壞品制備過程中能牢固地結(jié)合,。

4.對細胞表面的固有親合力差,。

如果樣品以苯乙烯樹脂做為包埋劑，徠卡倒置顯微鏡再行割斷法做掃描電鏡觀察是十分方便的,。因為苯乙烯聚合后,，氧化丙烯及醋酸異戊酌等很容易將其溶解，多次更換溶劑便可將苯乙烯清除干凈,。因此,，在制做透射電鏡標本時，多做出幾個包埋膠囊樣品,，待聚合后,，按上述方法割斷，將割斷好的樣品放在氧化丙烯中,，約2小時后便可經(jīng)酷酸異戊酷置換,、臨界點干燥。

除樹脂割斷法外,，徠卡倒置顯微鏡尚有有機溶劑(酒糟,、酷酸異戊圈等)割斷法；水溶性包埋劑(二甲基亞礬,、甘油等)割斷法及其它(冷凍,、氟里昂等)割斷法，操作都很容易,。再以酒精割斷法為例：樣品固定后用酒精脫水,，當脫水完成后,，將樣品投入預(yù)先裝有無水乙醇的膠囊中(避免出現(xiàn)氣泡)。將膠囊放在低溫裝置內(nèi)使乙醇固化,。進行樣品割斷,。割斷的樣品立即進入置于室溫的無水乙醇中，待乙醇融化后移入醋酸異戊酷,、進行臨界點干保,。

如果徠卡倒置顯微鏡應(yīng)用高分辨率掃描電鏡．金標記是理想的。鐵蛋白雖然有高電子密度,，但分子畢竟大小,，因而應(yīng)用有限。

徠卡倒置顯微鏡關(guān)于抗體的純化與透射電鏡所用的有關(guān)方法相同,，抗體與標記物的偶聯(lián)也不在此贅述,。

備注：徠卡倒置顯微鏡的掃描電鏡部分文章由北京中儀光科科技發(fā)展有限公司，編輯整理上傳,。