徠卡生物顯微鏡的超薄切片的定量x射線微區(qū)分析

徠卡生物顯微鏡不論外源佐的還是體內存在的物質,，作x射線微區(qū)分析時,，除鑒定其成分外，還需給出“量”,。這“量”（即濃度）有相對及兩種表示方法,。

徠卡生物顯微鏡為測試成分的濃度，L為測試成分的峰高tl為在分析區(qū)域內全部質量的x射線強度,，即連續(xù)射線的高度,。由于有機物與無機物的平均原子密度相差甚大，用超路切片100一200nm標本做分析時使出現了困難,。因為待測試成分的質量相對很少．而來源于超薄切片,，支持膜、金屬網及標本托等的背景（即連續(xù)X射線）十分強,，連續(xù)譜的計數與其成分原于序數的平方z”成正比,，因而高原子序數的元素產生的連續(xù)語的強度要比有機物的連續(xù)諾強度大得多。如Oq（z＝76）的連續(xù)諾強度比相同濃度的生物學材料的連續(xù)譜強度高100倍,。因此便集中考慮以超薄切片（其主要成分為C,，N．O和H）為背景，而不再考慮支持網,，金屬托等的影響,。于是人們制各組成與所測試的樣品相似的標準樣品,，將測試樣品的特征x射線強度與已知濃度的標準樣品特征x射線強度在相同測試條件下比較，便是徠卡生物顯微鏡超簿切片標本定量方法的基本原則,。

徠卡生物顯微鏡一個重要的問題便是定Pd值,，基本方法是制各生物標本的類似物。要求該類似物勻質,，含有與生物標本同樣的輕元素,。外加一種元素r其濃度范圍在生物標本所含的范圍內，在電子轟擊時應穩(wěn)定,，而且在100nm厚的切片中應有化學上的均勻性,。這種生物標本類似物很多，如Na和k（NaCNS及KCNS）镕子Sp毗樹脂,，700C聚合后超薄切片,，所余的聚合塊涪于酵以定Na及K的濃度。再如牛血清白蛋白,，牛胰島京和Phmnun中均共價結合有已知化學計量濃度的5和尸,。這些蛋白可做為含5和尸的生物標本類似鉤”。但這些生物標本類似韌并不能包羅生物標本中所有的成分,，往往是“類似物”,。幸運的是如果已知某一種元素的H，其它所有元素的H／‘均能間接求出,。因為一切生物材料的元素的連續(xù)譜都在相同的能帶中,，元素的u／x值有如此關。因此若徠卡生物顯微鏡測量出其它萊一元素的此g2了（Ej）,，其u7*很容易求出,。當持測元素約Iyf已知后，將x射線信號輸入檢測系統(tǒng),，經計算機處理后,，便可直接給出元素的濃度（m01A8）。

徠卡生物顯微鏡的X射線微區(qū)分析在生物學醫(yī)學中的應用

徠卡生物顯微鏡電子顯微術在生物學醫(yī)學領域已大顯身子,。60年代以來,，以電子顯微術為主要手段，在生物醫(yī)學領域做出貢獻的人很多,，其中四人獲諾貝爾獎,。他們是1974年生理醫(yī)學獎獲得者dhnC1aMde，Chr％tindenu肥和G‘or8ePalade,，1982年化學獎獲得者Aar恤Kk8,。而電子探針x射線微區(qū)分析提供的化學與超微結構信息的結合更有助于認識細胞機能。80年代以來,，科學家們用該技術手段揭示了細胞或細胞器內外的離子分布,，為正確認識細胞功能汀下了基礎,。某些現在視為理所當然的事實，是于不久前由x射線微區(qū)分析技術所得結構提供．或糾正了既往的錯誤觀念,。因此，徠卡生物顯微鏡分子細胞生物學才能有今天的繁榮局面?，F舉例如下：

1．徠卡生物顯微鏡50m1W等揭示線段體內的caz’濃度明顯低于腦漿中的ca”濃度,。線粒體內的低ca”濃度對于調節(jié)線粒體內的脫氫酶活性是必要的，但不適于胞漿中的酶系,。

2．徠卡生物顯微鏡Rick,，Thumu等揭示上皮細胞（如蛙皮膚，角膜及膀耽上皮等）對于離子起著屏障的作用,。

3．徠卡生物顯微鏡HaH,，GMPta等證明上皮細胞（如小腸上皮細胞）的腦漿部分與細胞間隙之間存在著濃度梯度，他們的資料與根據局部滲透作用提出的溶質與液體的運輸模式一致,，但不同于靜止的梯度假說,。

4．徠卡生物顯微鏡用電子探針探測了多種細胞內的Na4和Caz’濃度，發(fā)現過兩種離子的胞內濃度都低于用大塊組織測得的結果,。由于電子探針分析不受鄰近死細胞（高caz’）及胞外細胞間液體（高Na2’）的影響與污染,，科學家們都認為電子探針x射線微區(qū)分析的結果比用大塊組織分析出的結果更可靠。

徠卡生物顯微鏡電子探針不但在基礎研究方面提供了許多重要信息,，它在臨床醫(yī)學工作中,，也發(fā)揮著*的作用。如對于塵肺的診斷,，是由于石棉引起的,，還是“便金屬”，無機礦物所致,；膀恍纖維化,，腎結石，不明的色素沉著,，不明的肉芽腫等的成分分析等都需要用電子探針技術,。對于肺的沉積性的疾病（石棉肺或石英肺）用電子探針可辯明沉積物的成分,，但這些沉積物是否隨年齡而增加以及隨年齡的增加速度需用定量電子探針x射線微區(qū)分析技術測定,。

徠卡生物顯微鏡電子探針雖然不像透射與掃描電鎊那樣應用方便，但隨著研究工作的深入及有關知識與技術的普及,，會有更多的實驗室使用該技術并且會有更多的和更重要的成果出現,。

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