徠卡倒置熒光顯微鏡
徠卡倒置熒光顯微鏡由于高分辨掃描電鏡的間世,，為用表面標(biāo)記技術(shù)觀察細(xì)胞表面形態(tài)和區(qū)別兩類紉胞群與其表面形態(tài)相的機(jī)能提供了條件,。用此技術(shù)方法可研究細(xì)胞表面抗原,、受體的性質(zhì),，分布及運(yùn)動(dòng),。在原則上，透射電鎊與熒光顯微鏡用的免疫標(biāo)記技術(shù)也適用于免疫掃描電子顯微術(shù),。但由于徠卡倒置熒光顯微鏡掃描電鏡與透射電鏡的成像原理不同,，因此對(duì)免疫掃描電境術(shù)的標(biāo)記物有些特殊要求。這些要求是：
1．清晰,、容易識(shí)別的形狀‘對(duì)透射電鏡的標(biāo)記物要求電子致密度高,，掃描電鏡的標(biāo)記物電子密度不是重要問(wèn)題，而形狀是識(shí)別的重要因素,。
2．大小適宜：一般而言掃描電鏡分辨率低于透射電鏡,，此外掃描電鏡標(biāo)本要金屑鍍膜，這都影響樣品表面結(jié)構(gòu)的分辨,。因此標(biāo)記物若太小,、結(jié)構(gòu)過(guò)于微細(xì),，就不能與樣品表面固有結(jié)構(gòu)區(qū)別，但標(biāo)記物過(guò)于大,，又不能明確定出去面抗原位置,，因此標(biāo)記物大小要兼顧以上兩方面。
3.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,，在標(biāo)本處理過(guò)程中不會(huì)被損壞品制備過(guò)程中能牢固地結(jié)合。
4.對(duì)細(xì)胞表面的固有親合力差,。
符合以上條件的較常用的表面標(biāo)記切有人工合成的非生物材料（膠乳顆粒,，硅酸聚合物等），生物大分子（鐵蛋白,，血藍(lán)蛋白等）,，病毒（1MV），噬茵體和肢體金顆粒等,。
膠乳顆粒有聚苯乙烯和丙烯兩種*聚苯乙烯類顆粒表面疏水,，易發(fā)生自聚集。但與抗體以適當(dāng)比例混合時(shí),，不需偶聯(lián)便能很好地與抗體附著,。丙烯類顆粒表面有oH基，自發(fā)聚集少,。標(biāo)記時(shí)可利用oH基進(jìn)行偶聯(lián),。
如果樣品以苯乙烯樹(shù)脂做為包埋劑，再行割斷法做掃描電鏡觀察是十分方便的,。因?yàn)楸揭蚁┚酆虾?，氧化丙烯及醋酸異戊酌等很容易將其溶解，多次更換溶劑便可將苯乙烯清除干凈,。因此,，在制做透射電鏡標(biāo)本時(shí)，多做出幾個(gè)包埋膠囊樣品,，待聚合后,，按上述方法割斷，將割斷好的樣品放在氧化丙烯中,，約2小時(shí)后便可經(jīng)酷酸異戊酷置換,、臨界點(diǎn)干燥。
除樹(shù)脂割斷法外,，
尚有有機(jī)溶劑（酒糟,、酷酸異戊圈等）割斷法；水溶性包埋劑（二甲基亞礬,、甘油等）割斷法及其它（冷凍,、氟里昂等）割斷法,，操作都很容易。再以酒精割斷法為例：樣品固定后用酒精脫水,，當(dāng)脫水完成后,，將樣品投入預(yù)先裝有無(wú)水乙醇的膠囊中（避免出現(xiàn)氣泡）。將膠囊放在低溫裝置內(nèi)使乙醇固化,。進(jìn)行樣品割斷,。割斷的樣品立即進(jìn)入置于室溫的無(wú)水乙醇中，待乙醇融化后移入醋酸異戊酷,、進(jìn)行臨界點(diǎn)干保,。
硅酸聚合物顆粒為球形。使用時(shí)先加入Y一氨基三乙氧基丙硅烷（Y咆加n04r出hoxypr叩山1ane）使顆贛表面帶一NH3,，然后再與抗體偶聯(lián),。
TMv長(zhǎng)300nmp寬16nm助長(zhǎng)桿狀結(jié)構(gòu)。掃描電鏡下識(shí)別性好,。能與18G牢固地結(jié)合,，形成TMv一[8G復(fù)合物。如果紅細(xì)胞表面附有正常免[8G,，TMv便能使這種紅細(xì)腦布滿桿狀物*由于該病毒過(guò)長(zhǎng)使分辨率下降,，也有實(shí)驗(yàn)室將其截短使用。
常用的噬茵體是T4噬苗體（以大腸桿菌為宿主）有頭有尾,，形如瞅助,。在掃描電鏡下識(shí)別性能好。但體積較大,，由x174也是以大腸桿菌為宿主的噬茵體,，呈二十面體。因?yàn)轶w積較小,，需用高倍觀察,。
如果應(yīng)用高分辨率掃描電鏡．金標(biāo)記是理想的。鐵蛋白雖然有高電子密度,，但分子畢竟大小,，因而應(yīng)用有限。
關(guān)于抗體的純化與透射電鏡所用的有關(guān)方法相同,，抗體與標(biāo)記物的偶聯(lián)也不在此贅述,。
