徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡功能概述
一,、圖像處理功能
1．組織光學(xué)切片：共聚焦成像利用照明參與探測(cè)點(diǎn)火驅(qū)這一特件,，可有效抑制同—焦平面上非測(cè)量點(diǎn)的雜散熒光及來(lái)自樣品4非焦千向的熒光．從而獲得普通光鏡無(wú)法達(dá)到的分辨率,，同時(shí)具有深度識(shí)別能力（zui大箔度’般為200一400ym）及縱向分辨率,，因所能看到較厚生物標(biāo)本中的細(xì)節(jié),。它以一個(gè)破動(dòng)步進(jìn)馬達(dá)（zui小步距可達(dá)o．1ym）控制另物臺(tái)的升降，可以逐層獲得高反差,、高分期率、高靈敏度的二維光學(xué)橫斷面團(tuán)煉,，從而死活的或團(tuán)定的細(xì)胞及組織進(jìn)行無(wú)損傷的系刃“光學(xué)切片”,、得到其名層面的信息。這種功能也被形嫁地稱為“顯影C’r”,。
2．三維圖像重建：徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡通過薄晨光學(xué)切片功能,，可獲得標(biāo)本的真正意義上的二維數(shù)據(jù)，經(jīng)計(jì)算機(jī)圖像處理及三維重建軟件,，沿X,、Y和Z勒或其它任意角度來(lái)觀察標(biāo)本的外形及剖面，并得到其三維立體結(jié)構(gòu),，從而能十分靈活,、直觀地進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，并揭示亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系,。
3細(xì)胞物理和生物化學(xué)測(cè)定：徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡可進(jìn)行低光探測(cè),、活細(xì)胞定量分析和重復(fù)性的熒光定量分析．從而能對(duì)單細(xì)胞或細(xì)胞群的溶酶體、線粒體,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),、細(xì)胞骨架、結(jié)構(gòu)性蛋白質(zhì),、DKA,、RNA、酶和受休分子等細(xì)胞持異結(jié)構(gòu)的含量、組份及分布進(jìn)行定性,、定量,、定時(shí)及定位測(cè)定，同時(shí)還可測(cè)定分子擴(kuò)散,、膜電位,、氧化——還原狀態(tài)和配體結(jié)合等生化反匝變化程度、
另外,，
徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡可以對(duì)細(xì)胞的面積,、平均熒光強(qiáng)度、積分熒光強(qiáng)度,、細(xì)胞周長(zhǎng),、形狀因子及細(xì)胞內(nèi)顆粒數(shù)等參數(shù)進(jìn)行自動(dòng)測(cè)定。
4熒光的定量,、定位分析：徠卡激光掃描共聚顯微鏡可對(duì)單標(biāo)記或雙標(biāo)記細(xì)胞及組織標(biāo)傘的共聚焦熒光進(jìn)行定量分析,，并顯爾熒光沿2軸的強(qiáng)度變化；同時(shí)還可自動(dòng)將熒光
闖像與象差圖像重疊以顯示熒光在形態(tài)結(jié)構(gòu)的定位,。另外,，借助于光學(xué)切片功能可公毫下?lián)p失分辨率的條件g：測(cè)量標(biāo)本深居的熒光分布。徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡也非常適用于高靈敏度的快速免疫熒光測(cè)定,，可以準(zhǔn)確除測(cè)抗原表達(dá),、資光原他雜交斑點(diǎn)及細(xì)胞結(jié)合和殺傷的形態(tài)學(xué)持性并作定量分析。
5．它細(xì)胞內(nèi)離子的實(shí)時(shí)定量測(cè)定,；利用F1uo—3,、Indo—1、FMra—Red等多種熒光探針,，徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡可對(duì)單個(gè)細(xì)胞內(nèi)各種離子（cah,、K、Na,、M82和PII）的比例及動(dòng)態(tài)變化作毫秒級(jí)實(shí)時(shí)定顯分析,；可以定量探測(cè)胞質(zhì)中c。‘對(duì)腫瘤啟動(dòng)因子,、化學(xué)因子,、生長(zhǎng)因子及各種激素等刺激的反應(yīng)*使用雙熒光探針F1tM—3和SNARF可同g六則定ca：—和pH值。因此．激光掃描共聚焦顯鎮(zhèn)鏡能完成活細(xì)胞生理信號(hào)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),。
