電鏡樣品制備技術(shù)直接影響樣品的結(jié)構(gòu)和反差,。制備高質(zhì)量的超薄切片,，是發(fā)揮透

 

射電子顯微鏡優(yōu)良性能的前提。透射電子顯微鏡的分辨率理論上可達到o．3nm左右,，

 

但是六于樣品制備技術(shù)的限制,，分辨率很難達到理論值。對于生物樣品來說,，一般只能

 

達到2nm的水平,。

 

高質(zhì)量的超薄切片基本特征：①樣品應(yīng)該能耐受電子束的強烈照射．不變形和升華

 

等。②能進行屯了染色．提高反差,。③l50一100kv加速電壓范圍內(nèi),，切片厚度在

 

50—loonm。④樣品必須*下燥,，以保持電鏡L作狀態(tài)F不損傷,。

 

超揍切片技術(shù)包括取樣、固定,、脫水,、滲透、包埋,、超薄切片,、電子染色,、鏡檢等

 

制樣步驟,。其中取樣、固定,、脫水,、滲透、包埋等過程與半博團片制樣方法相同,，下面

 

重點介紹超薄切片的準備,、超薄切片和電子染色等過程。

 

一,、徠卡冰凍式切片機切片制樣步驟

 

1．銅網(wǎng)清洗：超薄切片要放在載網(wǎng)上才能進行染色等操作,，并zui終放到電鏡中觀察。載網(wǎng)是用元磁性金屬材料做成的,，厚50Pm,，直徑一般為3咖，也有2皿的,。一般用銅材料,，所以又叫銅網(wǎng)。在酶組織化學或免疫細胞化學中要用金網(wǎng)和鎳網(wǎng),，載網(wǎng)有各種形狀,?？筛鶕?jù)樣品和實驗需要，選擇載網(wǎng)的材質(zhì),、形狀和孔眼的大小,。銅網(wǎng)主要功能是承載支持膜和樣品。當受到電子束照射時,，支持膜不易破裂*照射到銅網(wǎng)網(wǎng)孔中的電子,，穿過樣品，通過透鏡成像,。碰到銅網(wǎng)載條上的電子,，被傳到地，不參與成像,，因此銅網(wǎng)還有把樣品上的熱量傳走,，減少樣品的熱漂移。銅網(wǎng)要經(jīng)過清洗,，方可使用,。目前清洗的方法主要有下列幾種：①超聲波清洗法：將用過的銅網(wǎng)放在盛有95％乙醇的燒杯里，置于超聲波清洗器（其內(nèi)有水）中,，在800一1000w下清洗30min,。將使用過的銅網(wǎng)上的支持膜及超薄切片等洗去。然后用蒸餾水清洗數(shù)次,，再在95％乙醇中清洗,，zui后放在墊有干凈濾紙的培養(yǎng)皿中烘干．鏡檢，備用,。②酸堿清洗法：將用過的銅網(wǎng)放在一培養(yǎng)皿中,，倒入一些濃硫酸或濃鹽酸，不斷地搖動（3—5min）,，直到銅網(wǎng)發(fā)亮為止,。然后先用自來水，后用蒸餾水洗幾次,，再放在95％乙醇中清洗,，zui后放到墊有干凈濾紙的培養(yǎng)皿中烘下，鏡檢,，備用,。也可將銅網(wǎng)放在盛有10％NaoH的小錐瓶或試管中煮沸數(shù)分鐘，然后用水洗,，干燥,、鏡檢，備用,。

 

備注：徠卡冰凍式切片機切片制樣方法由北京中儀光科科技有限公司編輯整理上傳,。