徠卡倒置熒光顯微鏡
徠卡倒置熒光顯微鏡由于高分辨掃描電鏡的間世，為用表面標記技術(shù)觀察細胞表面形態(tài)和區(qū)別兩類細胞群與其表面形態(tài)相的機能提供了條件,。用此技術(shù)方法可研究細胞表面抗原,、受體的性質(zhì)，分布及運動,。在原則上,，透射電鎊與熒光顯微鏡用的免疫標記技術(shù)也適用于免疫掃描電子顯微術(shù)。但由于徠卡倒置熒光顯微鏡掃描電鏡與透射電鏡的成像原理不同,，因此對免疫掃描電境術(shù)的標記物有些特殊要求。這些要求是：
1．清晰,、容易識別的形狀‘對透射電鏡的標記物要求電子致密度高,，掃描電鏡的標記物電子密度不是重要問題，而形狀是識別的重要因素,。
2．大小適宜：一般而言掃描電鏡分辨率低于透射電鏡,，此外掃描電鏡標本要金屑鍍膜，這都影響樣品表面結(jié)構(gòu)的分辨,。因此標記物若太小,、結(jié)構(gòu)過于微細，就不能與樣品表面固有結(jié)構(gòu)區(qū)別,，但標記物過于大,，又不能明確定出去面抗原位置，因此標記物大小要兼顧以上兩方面。
3.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,，在標本處理過程中不會被損壞品制備過程中能牢固地結(jié)合,。
4.對細胞表面的固有親合力差。
符合以上條件的較常用的表面標記切有人工合成的非生物材料（膠乳顆粒,，硅酸聚合物等）,，生物大分子（鐵蛋白，血藍蛋白等）,，病毒（1MV）,，噬茵體和肢體金顆粒等。
徠卡倒置熒光顯微鏡膠乳顆粒有聚苯乙烯和丙烯兩種*聚苯乙烯類顆粒表面疏水,，易發(fā)生自聚集,。但與抗體以適當比例混合時，不需偶聯(lián)便能很好地與抗體附著,。丙烯類顆粒表面有oH基,，自發(fā)聚集少。標記時可利用oH基進行偶聯(lián),。
如果樣品以苯乙烯樹脂做為包埋劑,，徠卡倒置熒光顯微鏡再行割斷法做掃描電鏡觀察是十分方便的。因為苯乙烯聚合后,，氧化丙烯及醋酸異戊酌等很容易將其溶解,，多次更換溶劑便可將苯乙烯清除干凈。因此,，在制做透射電鏡標本時,，多做出幾個包埋膠囊樣品，待聚合后,，按上述方法割斷,，將割斷好的樣品放在氧化丙烯中，約2小時后便可經(jīng)酷酸異戊酷置換,、臨界點干燥,。
除樹脂割斷法外，徠卡倒置熒光顯微鏡尚有有機溶劑（酒糟,、酷酸異戊圈等）割斷法,；徠卡水溶性包埋劑（二甲基亞礬、甘油等）割斷法及其它（冷凍,、氟里昂等）割斷法,，操作都很容易。再以酒精割斷法為例：樣品固定后用酒精脫水,，當脫水完成后,，將樣品投入預(yù)先裝有無水乙醇的膠囊中（避免出現(xiàn)氣泡）,。將膠囊放在低溫裝置內(nèi)使乙醇固化。進行樣品割斷,。割斷的樣品立即進入置于室溫的無水乙醇中,，待乙醇融化后移入醋酸異戊酷、進行臨界點干保,。
徠卡倒置熒光顯微鏡硅酸聚合物顆粒為球形,。使用時先加入Y一氨基三乙氧基丙硅烷（Y咆加n04r出hoxypr叩山1ane）使顆贛表面帶一NH3，然后再與抗體偶聯(lián),。
TMv長300nmp寬16nm助長桿狀結(jié)構(gòu),。掃描電鏡下識別性好。能與18G牢固地結(jié)合,，形成TMv一[8G復(fù)合物,。如果紅細胞表面附有正常免[8G，TMv便能使這種紅細腦布滿桿狀物*由于該病毒過長使分辨率下降,，也有實驗室將其截短使用,。
常用的噬茵體是T4噬苗體（以大腸桿菌為宿主）有頭有尾，形如瞅助,。在徠卡倒置熒光顯微鏡掃描電鏡下識別性能好,。但體積較大，由x174也是以大腸桿菌為宿主的噬茵體,，呈二十面體,。因為體積較小，需用高倍觀察,。
如果徠卡倒置熒光顯微鏡應(yīng)用高分辨率掃描電鏡．金標記是理想的,。鐵蛋白雖然有高電子密度，但分子畢竟大小,，因而應(yīng)用有限,。
徠卡倒置熒光顯微鏡關(guān)于抗體的純化與透射電鏡所用的有關(guān)方法相同，抗體與標記物的偶聯(lián)也不在此贅述,。
