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生物顯微鏡的成像原理(一)

時間:2011/11/25閱讀:19976
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北京中儀光科作為奧林巴斯顯微鏡,,尼康顯微鏡在中國地區(qū)的經(jīng)銷商,,為北京顯微鏡購買者提供zui的服務(wù).我們公司長期供應(yīng)工業(yè)顯微鏡,,體視顯微鏡,金相顯微鏡,,倒置顯微鏡,偏光顯微鏡,,熒光顯微鏡,,生物顯微鏡等等一系列產(chǎn)品。,。
 
感謝長期以來全國各個領(lǐng)域人士對我公司支持和幫助,。我們的技術(shù)文章將不斷更新,將對 原理,,結(jié)構(gòu),,如何使用,構(gòu)造,,有何用途,,顯微鏡價格 等等一系列問題做出解答。,。,。
 
顯微鏡(mimcroscPe)簡稱光鏡,是一種將肉眼無法看清楚的微生物體進(jìn)行光學(xué)放大成像的常用儀器c在生命科學(xué),、材料科學(xué),、基礎(chǔ)科學(xué)及眾多的微觀領(lǐng)域中都離不開顯微鏡。
 
1590年,,荷蘭的Hans父子始創(chuàng)放大10倍顯微鏡.
1758年,,Dounnd制成消色差透鏡,,提高了顯微鏡放大倍數(shù)。
1873年,,德國科學(xué)家Abbe設(shè)計成近代顯微鏡,。
1953年.上海江南光學(xué)儀器廠國產(chǎn)顯微鏡誕生,并陸續(xù)生產(chǎn)了熒光,、相襯,、偏光等顯微鏡。
 
生物及醫(yī)用顯微鏡可分為光學(xué)放大及電子放大兩大類,。前者按用途可分為普通型,、特種型、型顯微鏡和手術(shù)顯微鏡,。普通型生物顯微鏡僅供一般用途使用,,通常的農(nóng)用與醫(yī)用顯微鏡、倒置顯微鏡均屬這一類,。特種型生物顯微鏡可作某些的觀察和研究,。暗場生物顯微鏡、熒光顯微鏡,、偏光顯微鏡,、相襯和干涉相襯顯微鏡等均屬于這一類。型生物顯微鏡系指大型多用途的生物顯微鏡,,研究用生物顯微鏡和研究用生物顯微鏡等屬于這一類,。
 
顯檄鏡放大成像系統(tǒng)
 
顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)由物鏡和目鏡兩部分組成。因為被觀測的物體本身不發(fā)光,,而借助于外界照明,,故顯微鏡需要有一個照明系統(tǒng),這些部分都是由較復(fù)雜的透鏡組成,,尤其物鏡更為復(fù)雜,。
 
圖3—1是顯微鏡成僚的光路原理團,圖中的物鏡和目鏡均用薄透鏡表示,。
生物顯微鏡
顯微鏡的物體AB處于物鏡的2倍焦距之內(nèi)一倍焦距之外,,它首先通過物鏡成一大的倒立實像4’B’,且使之位于目鏡的物方焦平面上或焦平面以內(nèi)很靠近的地方,,然后目鏡將這一實像再次成一個正立虛假A”B”擴于無限遠(yuǎn)或人眼明視距離之外,,以供眼睛觀察。顯微鏡對物體進(jìn)行2次放大,,因此與放大鏡相比,,具有更高的放大倍率,能觀察到肉眼所不能直接觀察的微小物體,,分辨更細(xì)小的細(xì)節(jié),。在這里目鏡相當(dāng)于放大鏡.只不過這時放大鏡的物是物鏡所成的像而已,。由于物鏡所成的像是實保,因而可在實像處(即目鏡的物方焦平面處)安放各種用途分劃板,,供對準(zhǔn)或測量用,。
 
二、顯微鏡的放大率與分辨本領(lǐng)
 
1.顯微鏡的分辨本領(lǐng)
 
分辨本領(lǐng)主要指接物鏡分辨被檢查物體細(xì)微結(jié)構(gòu)的能力,,也就是說在顯微鏡下別的zui小微粒的大小或兩點之間zui短距離及某物點zui小直徑的限度,,便叫做顯微鏡的分辨本領(lǐng),或稱為鑒別率,。通常用d表示:
從式中可知,,顯微鏡的分辨率主要取決于光的波長和數(shù)值孔徑這兩個因素。d值越小,,分辨本領(lǐng)也就越強,,越能看清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)。鑒別率計算單位是Mm,。
 
生物顯微鏡的鑒別率的提高只有兩個辦法:
 
(1)增大物鏡的數(shù)值孔徑(鏡口率),。從圖3—2可以看出,影響數(shù)做孔徑(nsina)的因素有兩個:其一為物體上某點射人物鏡光錐角(鏡口角)的一半(sina),;其二為檢品與物鏡間媒質(zhì)的折射率n,。即數(shù)值孔徑為NA=nsina。鏡口角半數(shù)zui大能到90°,,故sina的zui大值為1.00,,這時物鏡的焦距zui短而曲度也很大,制造上是極為困難的,。即使能辦到,,在干燥系中的鏡口率只有l(wèi)×sin90°=1.00空氣n=1)o若再增大鏡口率便只有從媒質(zhì)著手,,所以便有水,、甘油,石蠟油和香柏油等浸潤均勻媒質(zhì)的應(yīng)用,,確實改進(jìn)了鏡口率不少,,它zui高可到1.40。如果用溴榮液可達(dá)1.67左右,,更接近蓋片和透鏡的折射率,。
 
(2)縮短光源的波長:采用紫外線作光源,波長可到0.1υm,,這樣放大倍數(shù)比自然光放大的倍數(shù)大3—4倍,,普通紫外線光波在0.2υm左右,即使能產(chǎn)生出0.1υm波長的紫外線,,一般透鏡也將把它吸收干凈,,無法利用,。 

顯微鏡的zui大數(shù)值孔徑可達(dá)1.5υm左右,在這種情形下:

即在這種顯微鏡里,,仍可分辨的兩點間zui短距離差不多等于所用光波波長的1/3,。假定綠光的光波的波長λ=5.46xl0ˉ5cm,那么顯微鏡能分辨的zui短距離為:

則這臺顯微鏡的zui高分辨距離也超不過0.182υm,。向眼在明視距離(250M)能分辨的兩點之間zui短距離為0.1mm,,約為上述d值的560倍,因此1臺光學(xué)顯微鏡的放大率有1000倍也就足夠了,。這是因為光的本性及光的繞射現(xiàn)象就限制了顯微鏡的放大極限,。凡是光波超過微粒直徑的2倍時,光線就很方便地繞過微粒而繼續(xù)前進(jìn),,所以普通干燥系顯微鏡的zui大鑒別率只能達(dá)到光源波長的1/2,,直徑小到0.2υm的微粒就無法被光學(xué)顯微鏡發(fā)覺。雖然后來應(yīng)用浸潤系方法,,如油鏡,,提高了折射率,其鑒別率也只不過能提高到光源波長的1/3而已,。而且還要用的透鏡才能達(dá)到,。

2.顯微鏡的放大率

對于有一定大小的細(xì)節(jié),除應(yīng)該用適當(dāng)?shù)臄?shù)值孔徑的物鏡而外,,整個顯微鏡也應(yīng)該有適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù)與之相適應(yīng),,才能看清細(xì)節(jié),這種放大倍率稱之為有效放大率,。這是實際下作應(yīng)該考慮的問題,,每個物鏡都有它的有效放大率。

在使用生物顯微鏡過程中,,每個物鏡都配多大的倍數(shù)的目鏡,,應(yīng)該特別注意。一般而言,,顯微鏡的zui高放大倍數(shù)不得超過所使用物鏡鏡口率(NA)的1000倍,,否則即產(chǎn)生畸變而失真。例如,,其物鏡的放大倍數(shù)為lO×,,為0.25,則0.25x1000=250,,即與這個物鏡配合使用的接目鏡其放大倍數(shù)不應(yīng)超過25倍,,因為25×10=250。與油浸系配合的目鏡放大倍數(shù)應(yīng)更小些,,例如,,有一個l00x,,N•A為1.4,則1.4x1000=1400,,即接目鏡的放大倍數(shù)不應(yīng)超過14×,,因為14×100=1400。通??偸堑捅段镧R配合高倍目鏡,,高倍物鏡配合低倍目鏡,便是這個道理,。

目前生物顯微鏡一般油浸物鏡NA=1.25或1.3左右,,所以,一般放大1250或1350倍已經(jīng)夠了,,而zui大川為1.5,,所以國家規(guī)定顯微鏡的zui高倍數(shù)為1250倍,而通常顯微鏡zui高倍咖良少超過1500倍,。如果1臺顯微鏡zui高放大2500倍,,實際上放大1000倍時有鑒別率。放大倍數(shù)太大,,也是無效的.因為放大到一定限度后,,把像再放大也不會使我們看到更小些的細(xì)節(jié),如果勉強放大,,只會使像變得模糊反而影響清晰,。也有超過1500倍的,其實也就是目鏡倍數(shù)大了一些,,這是為了照相或投影之用,。

生物顯微鏡各物鏡有效放大率情況見表3—2。

4.幾個有關(guān)的概念

(1)顯微鏡的機械管長,。是指從任何——個接物鏡的接合螺絲抵肩換器吻合處起,,到接口鏡筒上緣止的這一段距離而言為機械管長。

如有抽筒則指還未被拉起的長度.抽筒可從150mm拉到250mm,。在干燥系中是使用顯微鏡岡有的鏡筒長度或抑筒未被拉起的長度c油浸系則須拉抽簡拉到170M,,當(dāng)觀察不透明的物體時,,便應(yīng)拉到190mm或250mm,,這也是機械管長。現(xiàn)在一般無抽筒顯微鏡或有抽筒而未被拉起時.多固定為160mm,。

(2)生物顯微鏡的光學(xué)管長,。是指從接物鏡的上焦面起,到接目鏡下主焦面止,,這段距離而言為光學(xué)管長,。

它的簡單測定方法:從接物鏡上組透鏡的亡面量到接目鏡的光欄環(huán)隔為止,,約得1個近似數(shù)值。在干燥系情況下,,多為140mm,,也可小至128mm以下,油浸系則可高到180mm以上,。光學(xué)管長關(guān)系著次級放大倍數(shù),,非常重要。

(3)顯微鏡的操作距離,。是指接物鏡下端與蓋片之間的距離而言,,為操作距離。

一般鑒別率小者則操作距離大,,反之則小,。因為操作距離大,鏡口角一定小,,于是鏡口率也小,,即吸收光量的能力弱,所以鑒別率就受到限制,。反之操作距離小,則接物鏡與蓋片越接近,,則鏡口角就大,,而吸收光量也相應(yīng)增大,鑒別率自然會增強,。

一般顯微鏡的操作距離為16—0.65mm,,但也有長至55mm而短至O.5mm的。

(4)明視距離,。出于眼睛的調(diào)節(jié)作用,,所看清楚的zui遠(yuǎn)和zui近的兩點,分別叫遠(yuǎn)點和近點,,正常眼遠(yuǎn)點無限遠(yuǎn)處,,近點在10—15cm。當(dāng)物體距離眼睛25cm時,,在人眼的視網(wǎng)膜上造的像zui為清晰,。而且看起來不易感到疲勞,這個距離叫明視距離,。顯微鏡的明視距離規(guī)定為25cm,,就是這個道理。

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