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顯微鏡的zui大數(shù)值孔徑可達(dá)1.5υm左右,在這種情形下:
即在這種顯微鏡里,,仍可分辨的兩點間zui短距離差不多等于所用光波波長的1/3,。假定綠光的光波的波長λ=5.46xl0ˉ5cm,那么顯微鏡能分辨的zui短距離為:
則這臺顯微鏡的zui高分辨距離也超不過0.182υm,。向眼在明視距離(250M)能分辨的兩點之間zui短距離為0.1mm,,約為上述d值的560倍,因此1臺光學(xué)顯微鏡的放大率有1000倍也就足夠了,。這是因為光的本性及光的繞射現(xiàn)象就限制了顯微鏡的放大極限,。凡是光波超過微粒直徑的2倍時,光線就很方便地繞過微粒而繼續(xù)前進(jìn),,所以普通干燥系顯微鏡的zui大鑒別率只能達(dá)到光源波長的1/2,,直徑小到0.2υm的微粒就無法被光學(xué)顯微鏡發(fā)覺。雖然后來應(yīng)用浸潤系方法,,如油鏡,,提高了折射率,其鑒別率也只不過能提高到光源波長的1/3而已,。而且還要用的透鏡才能達(dá)到,。
2.顯微鏡的放大率
對于有一定大小的細(xì)節(jié),除應(yīng)該用適當(dāng)?shù)臄?shù)值孔徑的物鏡而外,,整個顯微鏡也應(yīng)該有適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù)與之相適應(yīng),,才能看清細(xì)節(jié),這種放大倍率稱之為有效放大率,。這是實際下作應(yīng)該考慮的問題,,每個物鏡都有它的有效放大率。
在使用生物顯微鏡過程中,,每個物鏡都配多大的倍數(shù)的目鏡,,應(yīng)該特別注意。一般而言,,顯微鏡的zui高放大倍數(shù)不得超過所使用物鏡鏡口率(NA)的1000倍,,否則即產(chǎn)生畸變而失真。例如,,其物鏡的放大倍數(shù)為lO×,,為0.25,則0.25x1000=250,,即與這個物鏡配合使用的接目鏡其放大倍數(shù)不應(yīng)超過25倍,,因為25×10=250。與油浸系配合的目鏡放大倍數(shù)應(yīng)更小些,,例如,,有一個l00x,,N•A為1.4,則1.4x1000=1400,,即接目鏡的放大倍數(shù)不應(yīng)超過14×,,因為14×100=1400。通??偸堑捅段镧R配合高倍目鏡,,高倍物鏡配合低倍目鏡,便是這個道理,。
目前生物顯微鏡一般油浸物鏡NA=1.25或1.3左右,,所以,一般放大1250或1350倍已經(jīng)夠了,,而zui大川為1.5,,所以國家規(guī)定顯微鏡的zui高倍數(shù)為1250倍,而通常顯微鏡zui高倍咖良少超過1500倍,。如果1臺顯微鏡zui高放大2500倍,,實際上放大1000倍時有鑒別率。放大倍數(shù)太大,,也是無效的.因為放大到一定限度后,,把像再放大也不會使我們看到更小些的細(xì)節(jié),如果勉強放大,,只會使像變得模糊反而影響清晰,。也有超過1500倍的,其實也就是目鏡倍數(shù)大了一些,,這是為了照相或投影之用,。
4.幾個有關(guān)的概念
(1)顯微鏡的機械管長,。是指從任何——個接物鏡的接合螺絲抵肩換器吻合處起,,到接口鏡筒上緣止的這一段距離而言為機械管長。
如有抽筒則指還未被拉起的長度.抽筒可從150mm拉到250mm,。在干燥系中是使用顯微鏡岡有的鏡筒長度或抑筒未被拉起的長度c油浸系則須拉抽簡拉到170M,,當(dāng)觀察不透明的物體時,,便應(yīng)拉到190mm或250mm,,這也是機械管長。現(xiàn)在一般無抽筒顯微鏡或有抽筒而未被拉起時.多固定為160mm,。
(2)生物顯微鏡的光學(xué)管長,。是指從接物鏡的上焦面起,到接目鏡下主焦面止,,這段距離而言為光學(xué)管長,。
它的簡單測定方法:從接物鏡上組透鏡的亡面量到接目鏡的光欄環(huán)隔為止,,約得1個近似數(shù)值。在干燥系情況下,,多為140mm,,也可小至128mm以下,油浸系則可高到180mm以上,。光學(xué)管長關(guān)系著次級放大倍數(shù),,非常重要。
(3)顯微鏡的操作距離,。是指接物鏡下端與蓋片之間的距離而言,,為操作距離。
一般鑒別率小者則操作距離大,,反之則小,。因為操作距離大,鏡口角一定小,,于是鏡口率也小,,即吸收光量的能力弱,所以鑒別率就受到限制,。反之操作距離小,則接物鏡與蓋片越接近,,則鏡口角就大,,而吸收光量也相應(yīng)增大,鑒別率自然會增強,。
一般顯微鏡的操作距離為16—0.65mm,,但也有長至55mm而短至O.5mm的。
(4)明視距離,。出于眼睛的調(diào)節(jié)作用,,所看清楚的zui遠(yuǎn)和zui近的兩點,分別叫遠(yuǎn)點和近點,,正常眼遠(yuǎn)點無限遠(yuǎn)處,,近點在10—15cm。當(dāng)物體距離眼睛25cm時,,在人眼的視網(wǎng)膜上造的像zui為清晰,。而且看起來不易感到疲勞,這個距離叫明視距離,。顯微鏡的明視距離規(guī)定為25cm,,就是這個道理。
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