半薄的部分,，可從cryoprotected生物材料的冷凍塊切片在-90°C。徠卡冰凍切片機(jī)的使用這些路段的優(yōu)點(diǎn)是subcellullar形態(tài)保存和改進(jìn)的光學(xué)分辨率,?；瘜W(xué)固定的生物材料是cryoprotected浸泡在2.3米，蔗糖和浸泡在液氮中冷凍到標(biāo)本引腳,。切片是執(zhí)行與調(diào)整,，切較厚部分（0.3至1μm）的ultramicrotome的厚度控制在低溫-ultramicrotome。一旦已取得的部分,，他們是從使用蔗糖液滴的刀,，但它們置于玻片上，而不是放在標(biāo)本電網(wǎng),。
玻片上應(yīng)注明對其中的部分將被放置標(biāo)記的玻璃,，洗，然后外套的玻璃面的鉆石鉛筆,。用洗滌劑和水清洗后,，他們可能會涂要么明膠，聚-L-賴氨酸或阿爾辛藍(lán),。對于這些*,，下降1％明膠被涂污在玻璃上使用的是第二張幻燈片和風(fēng)干的幻燈片。對于其他兩種方法,，見下文,。涂層的幻燈片，可確保部分粘在標(biāo)簽過程的幻燈片,。
免疫標(biāo)記的玻片上的冰凍切片,。
浸入幻燈片，與部分,，成Coplin含有PBS JAR,。這將洗去蔗糖。
浸入到用含50毫米氯化銨在為了解渴自由醛基的幻燈片,。
浸入到PBS的幻燈片,，包含阻斷劑（如1％明膠）,。刪除的幻燈片，幻燈片等的部分和他們周圍的區(qū)域保持濕干表面,。重要的是,，部分沒有干出來的。
把加入10μl-20μL稀釋,，離心抗體的上部分,，在潮濕的氣氛中離開15分鐘到24小時。
抗體洗凈,，用新鮮的PBS（一個Coplin JAR）,。
重復(fù)抗體孵育和洗滌步驟與二級fluoresceinated抗體（步驟4和5）。
安裝在90％甘油的PBS的幻燈片,，或沖洗水和含Moviol或Permount防褪色的化合物掛載,。這將產(chǎn)生一個*性的裝載熒光信號是不容易漂白，當(dāng)暴露在紫外線下,。
徠卡冰凍切片機(jī)與自體熒光的問題
如果所研究的材料是用戊二醛固定,，然后自體熒光將出席。這可以由0.1％的PBS（pH值8）治療的部分被刪除,。硼庫存解決方案,，可以無限期地儲存在pH值12。在pH 7分子的半衰期為10秒,。在pH 8的半衰期為100秒,。
如果從組織的自體熒光，然后金或酶標(biāo)記的抗體可以取代二次熒光抗體,。在這樣的抗體結(jié)合可以可視化使用銀增強(qiáng)揭示的黃金,，或產(chǎn)生酶細(xì)胞化學(xué)在組織切片的彩色反應(yīng)產(chǎn)物。
聚-L-賴氨酸涂層玻片
在100毫升蒸餾水溶解聚-L-賴氨酸10毫克,。
保留干凈,，標(biāo)志著幻燈片，在這30分鐘的解決方案,。
無論是空氣干燥,，不洗或沖洗蒸餾水簡要。
阿爾辛藍(lán)玻片上的涂層,。
0.5％阿爾辛藍(lán)原液
這個解決方案1:100用蒸餾水稀釋
在稀溶液中10分鐘,，浸干凈，顯著的幻燈片,。
簡要蒸餾水沖洗幻燈片,。這洗之后，他們將繼續(xù)略帶藍(lán)色,。
晾干后方可使用,，并且只使用新鮮配制的幻燈片,。
