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關于細胞培養(yǎng)過程中會遇到的常見問題解決措施
一、判斷細胞污染的方法：
狀態(tài)1：細胞培養(yǎng)液變渾濁了,，經常見到是米湯樣,，黃色液體，一般認為細菌污染,。
狀態(tài)2：細胞培養(yǎng)基內含有能動的小黑點,，一般認為是黑膠蟲。
狀態(tài)3：胞培養(yǎng)基清亮,，但是能看到飄在培養(yǎng)液帶有毛毛的白色的菌狀物質,，有可能就是真菌感染。
應對措施：細胞污染了就直接扔了，還得把培養(yǎng)箱用酒精棉球擦干凈,，并用紫外照射半小時,，防止再次污染。同時建議細胞培養(yǎng)時,，在培養(yǎng)基中加入青鏈霉素(尤其是初學者)
二,、胞培養(yǎng)過程中，細胞周圍包括細胞上有很多小黑點怎么辦?
策略1：用胰酶消化下來后,，低速短時間離心,，不同實驗室不一樣，如果平時是1000轉5min的話,，就可以改為700轉3min,，用新的細菌培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細胞，細胞收集是少一點,，但是一般都能干凈很多,。多傳幾代就好多了。
策略2：如果多次嘗試之后還是不干凈,，就懷疑是否存在支原體污染了,，用抗支原體藥就OK了。一般用上3～5天,，細胞就干干凈凈了,。
三、細胞胞質疏松,，狀態(tài)不好,，養(yǎng)不起來怎么辦?
策略1：一般情況下，從血清下手就行,，要么換好血清，要么提高血清濃度,，血清濃度提高到15%～20%培養(yǎng)48h,，換成正常10%的濃度，用高濃度的血清培養(yǎng)時間過長對細胞有毒性,。
策略2：血清下手之后可以同時采取提高細胞密度的方法,，從培養(yǎng)瓶換到六孔板，12孔板等,，細胞密度大,，細胞分泌的細胞因子多，腫瘤細胞通過旁分泌途徑促進細胞生長,。
預防策略：細胞胞質疏松,，老化的原因在于細胞傳代次數比較多，胰酶消化時間太長，這時候,，一定要控制細胞傳代次數,，注意胰酶消化時間，胰酶消化時間過長,，容易導致細胞狀態(tài)不佳以及胞質疏松,。有一招，元元沒試過,，可以嘗試,，將細胞凍起來，過段時間復蘇,，細胞會長得比較好,。
四、長途運輸過來裝滿培養(yǎng)液的細胞如何處理
很多人都會遇到從其他地方買來細胞或者快遞運來細胞,，裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細胞怎么處理的問題,。
第1步：先放37℃培養(yǎng)箱放置4小時，這樣細胞在通過長途跋涉以后得以穩(wěn)定,，觀察細胞狀態(tài),。
第2步：將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基1:1稀釋，如果細胞狀態(tài)不好,，可以將血清濃度提到15%,，否則正常培養(yǎng)，這樣有一個過渡期,，不至于細胞換血清之后狀態(tài)不佳,，15%的血清培養(yǎng)48h之后換成正常濃度培養(yǎng)。