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細胞培養(yǎng)時的具體步驟剖析
閱讀：1095 發(fā)布時間：2018-8-28
細胞培養(yǎng)時的具體步驟剖析
一,、復蘇
1.把凍存管從液氮中取出來,，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動,。液體都融化后（大概1-1.5分鐘）,，拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)瓶的15ml的離心管中（用培養(yǎng)瓶把凍存管洗一遍,，把粘在壁上的細胞都洗下來）,，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3.把上清液倒掉,，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來,。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布,。
4.標好細胞種類和日期,、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，細胞貼壁后換培養(yǎng)基,。
5.三天換一次培養(yǎng)基。
二,、傳代
1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代,。
2.把原有培養(yǎng)基吸掉。
3.加適當?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細胞就行）,，消化1-2分鐘,。
4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5.用移液槍吹打細胞,，把細胞都懸浮起來,。
6.把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘,。
7.倒掉上清液,，加1-2ml培養(yǎng)瓶，把細胞都吹起來,。
8.根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中,。一般，癌細胞分5個,，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng),。
三,、凍存
把細胞消化下來并離心。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,，分裝到滅菌的凍存管中,，靜止幾分鐘,，寫明細胞種類，凍存日期,。4℃30min,，-20℃30min，-80℃過夜,，然后放到液氮灌中保存,。
凍存液的配制：70%的*培養(yǎng)基+20S+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖,。