現(xiàn)代液相色譜中,，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇,。但是色譜填料的選擇范圍很寬,，要做合適的選擇,，首先必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解,。下面將對(duì)幾種常見的色譜填料極其各種的性能做各一個(gè)簡要的介紹。

（1）,、硅膠填料

    硅膠填料主要應(yīng)用正相色譜及反相色譜柱中,，正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團(tuán),，如胺基團(tuán)（NH2,APS）和氰基團(tuán)（CN,，CPS）的鍵合相填料。

由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團(tuán)的極性較強(qiáng),，因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強(qiáng)弱的組份zui先被沖洗出色譜柱,。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低,，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene  Chloride）等。

     反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相,。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水,，緩沖液與甲醇,，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合zui先被沖出，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。常用的反相填料有C18（ODS）,、C8（MOS）、C4（B）,、C6H5（Phenyl）等,。

（2）、聚合物填料

    聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,，其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1～14均可使用,。相對(duì)與硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性,；大孔的聚合物填料對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低,。

（3）,、其他無機(jī)填料

   其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途,。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,，又由于HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用,。氧化鋁也可用于HPLC,，氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用,。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng),，應(yīng)用范圍受到一定的限制,，所以未能廣泛應(yīng)用，新型氧化鋯填料也可用于HPLC,，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用PH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃,。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。

二,、怎樣選擇填料粒度

   目前,，商品化的色譜料粒度從1um到超過30um均有銷售，而目前分析分離主要用3um,、5um和10um填料,，填料的粒度主要影響填充柱的兩個(gè)參數(shù)，即柱效和背壓,。粒度越小,，填充柱的柱效越高；小于3um的填料應(yīng)用,，在相同選擇性條件下,，提高柱效可提高分離度，但不是*的因素,。如果固定相選擇是正確,，但是分離度不夠，那么選擇更小粒度的填料是很有用的,，3um填料填充柱的柱數(shù)比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%,；然而，3um的色相譜的背壓卻是5um的2倍,。與此同時(shí),，柱效提高意味著在相同條件下可以選擇更短的色譜柱，以縮短分析時(shí)間,，另外,，可以采用低粘度的溶劑做流動(dòng)相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇,，以降低色譜柱的壓力,。

三、如何保證良好的柱性能與柱壽命

◆ 認(rèn)證閱讀色譜柱使用說明書,；

◆ 使用填充良好的色譜柱,；

◆ 盡量減少壓力波動(dòng)，避免機(jī)械及熱沖擊,；

◆ 使用保護(hù)柱及在線過濾器,；

◆ 經(jīng)常以強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱；

◆ 充分過濾樣品及流動(dòng)相,，盡量避免雜質(zhì)微粒與強(qiáng)保留成分,；

◆ 用穩(wěn)定的固定相（C18zui穩(wěn)定）；

◆ 在中等PH值操作（6~8）,，用有機(jī)緩沖溶液,；

◆ 色譜柱使用溫度小于40℃,；

◆ 硅膠基質(zhì)的的色譜柱，應(yīng)保持流動(dòng)相的PH值范圍在3.0~8.0,；

◆ 在水流動(dòng)相與緩沖溶液中加200ppm的疊氮鈉,；

◆ 流動(dòng)相中含有緩沖溶液，應(yīng)注意應(yīng)95∶5的水及有機(jī)溶劑過渡,，有機(jī)溶劑不能低于5%,；

◆ 過夜或貯存時(shí)，沖洗掉鹽和緩沖液,，用純有機(jī)溶劑流動(dòng)相保存（乙晴）,。