手性色譜柱(ChiralHPLCColumns)是由具有光學(xué)活性的單體,,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相(ChiralStationaryPhases),。通過(guò)引入手性環(huán)境使對(duì)映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異,從而達(dá)到光學(xué)異構(gòu)體拆分的目的,。要實(shí)現(xiàn)手性識(shí)別,,手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵,、偶級(jí)-偶級(jí)作用,、π-π作用、靜電作用,、疏水作用或空間作用,。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結(jié)果。這些相互作用通過(guò)影響包埋復(fù)合物的形成,,特殊位點(diǎn)與分析物的鍵合等而改變手性分離結(jié)果,。由于這種作用力較微弱,,因此需要仔細(xì)調(diào)節(jié),、優(yōu)化流動(dòng)相和溫度以達(dá)到分離效果。
手性色譜柱使用中可能出現(xiàn)的常見(jiàn)問(wèn)題有:
1,、正相手性色譜柱柱壓高
手性柱壓力高的原因有可能是流動(dòng)相中醇的含量太高,,或者液相流路中有堵塞,或者柱頭有樣品析出,,或者填料被壓縮柱頭塌陷等,。針對(duì)不同的原因請(qǐng)有針對(duì)性的采取相應(yīng)的措施。如果是流動(dòng)相中醇含量太高,,則需要升高溫度或者降低流速,。如果液相流路中有堵塞需要排除堵塞。如果柱頭有樣品析出則需要使用流動(dòng)相溶解樣品以及樣品預(yù)處理除掉樣品中易析出的成分,。如果填料被高壓壓縮柱頭塌陷,,則需要重新購(gòu)買新的手性柱。
2,、手性柱譜圖中異構(gòu)體的分離度下降
分離度下降的原因有可能是色譜柱以外的色譜條件發(fā)生了變化,,或者色譜柱受損柱效發(fā)生了變化,。首先查看是否是因?yàn)闇囟取⒘鲃?dòng)相成分等外在因素發(fā)生了變化導(dǎo)致分離度下降,,如果排除了各種外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降導(dǎo)致的,。如果分離度在短時(shí)間內(nèi)急劇下降伴隨柱壓上升,可能是有強(qiáng)極性溶劑損害了柱子,;如果分離度在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)慢慢下降,,可能是柱頭受污染或柱頭塌陷,需要更換保護(hù)柱或者更換分析柱,。