手性色譜柱(ChiralHPLCColumns)是由具有光學活性的單體,,固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相(ChiralStationaryPhases),。通過引入手性環(huán)境使對映異構體間呈現(xiàn)物理特征的差異,從而達到光學異構體拆分的目的,。要實現(xiàn)手性識別,,手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵,、偶級-偶級作用,、π-π作用、靜電作用,、疏水作用或空間作用,。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結果。這些相互作用通過影響包埋復合物的形成,,特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結果,。由于這種作用力較微弱,因此需要仔細調(diào)節(jié),、優(yōu)化流動相和溫度以達到分離效果,。
手性色譜柱使用中可能出現(xiàn)的常見問題有:
1、正相手性色譜柱柱壓高
手性柱壓力高的原因有可能是流動相中醇的含量太高,,或者液相流路中有堵塞,,或者柱頭有樣品析出,或者填料被壓縮柱頭塌陷等,。針對不同的原因請有針對性的采取相應的措施,。如果是流動相中醇含量太高,則需要升高溫度或者降低流速,。如果液相流路中有堵塞需要排除堵塞,。如果柱頭有樣品析出則需要使用流動相溶解樣品以及樣品預處理除掉樣品中易析出的成分。如果填料被高壓壓縮柱頭塌陷,,則需要重新購買新的手性柱,。
2、手性柱譜圖中異構體的分離度下降
分離度下降的原因有可能是色譜柱以外的色譜條件發(fā)生了變化,,或者色譜柱受損柱效發(fā)生了變化,。首先查看是否是因為溫度、流動相成分等外在因素發(fā)生了變化導致分離度下降,,如果排除了各種外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降導致的,。如果分離度在短時間內(nèi)急劇下降伴隨柱壓上升,可能是有強極性溶劑損害了柱子,;如果分離度在長時間內(nèi)慢慢下降,,可能是柱頭受污染或柱頭塌陷,需要更換保護柱或者更換分析柱,。