本文介紹了紫外可見分光光度法的特征,、原理及應(yīng)用，并 列舉多項實例說紫外可見分光光度法在各個ling域中的應(yīng)用,。
關(guān)鍵詞
有機(jī)分析 吸收光譜 紫外可見分光光度法
1.概述
人們在實踐中早已總結(jié)出不同顏色的物質(zhì)具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì),。根據(jù)物質(zhì)的這些特性可對它進(jìn)行有效的分析和判別。由于顏色本就惹人注意,，根據(jù)物質(zhì)的顏色深淺程度來對物質(zhì)的含量進(jìn)行估計,，可追溯到古代及中世紀(jì)。1852年,，比爾（Beer）參考了布給爾（Bouguer）1729年和朗伯（Lambert）在1760年所發(fā)表的文章,，提出了分光光度的基本定律,，即液層厚度相等時，顏色的強(qiáng)度與呈色溶液的濃度成比例,，從而奠定了分光光度法的理論基礎(chǔ),，這就是的比爾朗伯定律。1854年,，杜包斯克（Duboscq）和奈斯勒（Nessler）等人將此理論應(yīng)用于定量分析化學(xué)ling域,，并且設(shè)計了*臺比色計。到1918年,，美國國家標(biāo)準(zhǔn)局制成了*臺紫外可見分光光度計,。此后，紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進(jìn),，又出現(xiàn)自動記錄,、自動打印、數(shù)字顯示,、微機(jī)控制等各種類型的儀器,，使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高，其應(yīng)用范圍也不斷擴(kuò)大,。
紫外可見分光光度法從問世以來,，在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上,，促使分光光度計儀器的不斷,，功能 加齊全，使得光度法的應(yīng)用 拓寬了范圍,。目前，分光光度法已為工農(nóng)業(yè)各個部門和科學(xué)研究的各個ling域所廣泛采用,，成為人們從事生產(chǎn)和科研的有力測試手段,。我國在分析化學(xué)ling域有著堅實的基礎(chǔ)，在分光光度分析方法和儀器的制造方面上都已達(dá)到 的水平［1］［2］
2.原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動能ji躍遷和電子能ji躍遷的結(jié)果,。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),，其吸收光能量的情況也就不會相同,，因此，每種物質(zhì)就有其*的,、固定的吸收光譜曲線,，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測 定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ),。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分,、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段,。
紫外可見分光光度法的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律。即物質(zhì)在 濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比,，其數(shù)學(xué)表示式如下：
A=錬c
式中：A—吸光度（又稱光密度,、消光值），
å—摩爾吸光系數(shù)（其物理意義為：當(dāng)吸光物質(zhì)濃度為1摩爾/升,，吸收池厚為1厘米,，以 波長原光通過時，所引起的吸光值A(chǔ)）,，b—吸收介質(zhì)的厚度（厘米）,，c—吸光物質(zhì)的濃度（摩爾/升）。
物質(zhì)的顏色和它的電子結(jié)構(gòu)有密切的關(guān)系,，當(dāng)輻射（光子）引起電子躍遷使分子（或離子）從基態(tài)上升到激發(fā)態(tài)時,，分子（或離子）就會在可見區(qū)或紫外呈現(xiàn)吸光，顏色的發(fā)生或變化是和分子的正常電子結(jié)構(gòu)的變形的,。當(dāng)分子中含有一個或 多的生色基因（即具有不飽和鍵的原子基團(tuán)）,，輻射就會引起分子中電子能量的改變。常見的生色團(tuán)有：
CO,， -N=N-,， -N=O，-C N,，CS
如果兩個生色團(tuán)之間隔一個碳原子,，則形成共軛基團(tuán)，會使吸收帶移向較長的波長處（即紅移）,，且吸收帶的強(qiáng)度顯著增加,。當(dāng)分子中含有助色基團(tuán)（有未共用電子對的基團(tuán)）時，也會產(chǎn)生紅移效應(yīng),。常見的助色基團(tuán)有：-OH -NH2,， -SH， -Cl, -Br, -I
3.特點
分光光度法對于分析人員來說,，可以說是有用的工具之一,。每一個分析實驗室都離不開紫外可見分光光度計。分光光度法的主要特點為：
（1）應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,，因此均可借此法加以測定,。到目前為止，化學(xué)元素周期表上的所有元素（除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法,。在上發(fā)表的有關(guān)分析的論文總數(shù)中,，光度法約占28%，我國約占所發(fā)表論文總數(shù)的33% ,。
（2）靈敏度高
由于新的顯色劑的大量合成,，并在應(yīng)用研究方面取得了可喜的進(jìn)展,，使得對元素測定的靈敏度有所推進(jìn)，特別是有關(guān)多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,，使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到數(shù)十萬,。
（3）選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定，如鈷,、鈾,、鎳、銅,、銀,、鐵等元素的測定，已有比較滿意的方法了,。
（4）準(zhǔn)確度高
對于一般的分光光度法,，其濃度測量的相對誤差在1～3%范圍內(nèi)，如采用示差分光光度法進(jìn)行測量,，則誤差可減少到0.X%,。
（5）
適用濃度范圍廣
可從常量（1%～50%）（尤其使用示差法）到痕量（10-8～10-6%）（經(jīng)預(yù)富集后）。
（6）
分析成本低,、操作簡便,、快速
由于分光光度法具有以上優(yōu)點，因此目前仍廣泛地應(yīng)用于化工,、冶金,、地質(zhì)、醫(yī)學(xué),、食品,、制藥等部門及環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)。單在水質(zhì)分析中的應(yīng)用就很廣,，目前能有直接法和間接法測定的金屬和非金屬元素就有70多種,。
4應(yīng)用
4.1檢定物質(zhì)
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是大吸收波長雖ax和摩爾吸收系數(shù)澹是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù),。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用,。在外的藥典中,，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的大吸收波長和吸收系數(shù)載入其中,，為藥物分析提供了很好的手段。
4.2與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜,。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)一致,。如果沒有標(biāo)樣,，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進(jìn)行比較,。 這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高,，且測定條件要相同,。
4.3比較大吸收波長吸收系數(shù)的一致性
由于紫外吸收光譜只含有2～3個較寬的吸收帶，而紫外光譜主要是分子內(nèi)的發(fā)色團(tuán)在紫外區(qū)產(chǎn)生的吸收,，與分子和其它部分關(guān)系不大,。具有相同發(fā)色團(tuán)的不同分子結(jié)構(gòu)，在較大分子中不影響發(fā)色團(tuán)的紫外吸收光譜,，不同的分子結(jié)構(gòu)有可能有相同的紫外吸收光譜,，但它們的吸收系數(shù)是有差別的。如果分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收波長相同,，吸收系數(shù)也相同,，則可認(rèn)為分析樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一物質(zhì)。
例1
己二烯-1,，5（CH2=CHCH2CH2=CH2）的大吸收波長雖ax為178nm（摩爾吸收系數(shù)為26000）,，而己烯-1（CH2=CHCH2CH2CH2CH3）的大吸收波長為雖ax 為177nm（摩爾吸收系數(shù)邐11800）。此兩個物質(zhì)有相同的發(fā)色團(tuán),，雖ax值基本相同,，但值不同，二烯的逯當(dāng)鵲ハ┑拇?。震~得饔邢嗤牡舜瞬還查畹姆⑸?，其吸收波长皆?于單個發(fā)色團(tuán)的值，但逯翟蛩嫦嗤⑸攀康腦黽傭黽?。染J屑父齜⑸瘧舜斯查,，則吸收長向紅移動。象丁二烯-1,，3（CH2=CHCH=CH2）與己二烯-1,，5（CH2=CHCH2 CH2CH=CH2）相比，同樣有兩個雙鍵,，但丁二烯-1,，3中為共軛體系，它的大吸收長雖 ax為210nm,，而摩爾吸收系數(shù)逯翟蠐爰憾-1,，5基本一樣。
4.4純度檢驗
例2
紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質(zhì),。如果化合物的紫外可 見光區(qū)沒有明顯的吸收峰,，而它的雜質(zhì)在紫外區(qū)內(nèi)有較強(qiáng)的吸收峰，就可以檢測出化合物中的雜質(zhì)。
例3
檢測乙醇樣品含有的苯的雜質(zhì),。苯的大吸收波長在256nm,，而乙醇在此波長處沒有 吸收。在紫外吸收光譜上就能很明顯地看出來,。
如果化合物在紫外可見有吸收,，可用吸收系數(shù)檢測其純度。
例4
菲的氯仿溶液在296 nm處有強(qiáng)吸收,，邐12600,，log 邐4.10，用某方法精制的菲在紫外上測出的1og 逯當(dāng)缺曜嫉姆埔10%,，這說明實際含量只有90%,，其余的就很有可能是雜質(zhì)了。
例5
還可以用差示法來檢測樣品的純度,。取相同濃度的純品在同一溶劑中測定作空白對照 ,，樣品與純品之間的差示光譜就是樣品中含有雜質(zhì)的光譜。
4.5推測化合物的分子結(jié)構(gòu)
（1）
推測化合物的共軛體系和部分骨架
如果一個化合物在紫外區(qū)是透明的,，沒有吸收峰（吸收系數(shù)澹10）,，則說明不存在共軛體系 （指不存在多個相間雙鍵）。它可能是脂肪族碳?xì)浠衔?、胺,、腈、醇等不含雙鍵或環(huán)狀結(jié)構(gòu) 的化合物,。
如果在210-250nm有強(qiáng)吸收,，則可能有兩個雙鍵共軛系統(tǒng)（如共軛二烯或幔-不飽和酮）,。
如果在250-300nm有強(qiáng)吸收,，則可能具有3-5個不飽和共軛系統(tǒng)。
如果在260-300nm有中強(qiáng)吸收（吸收系數(shù)=200-1000）,，則可能有苯環(huán),。
如果在250-300nm有弱吸收，則可能存在羰基基團(tuán)
（2）
區(qū)分化合物的構(gòu)型和構(gòu)象
例6
化合物二苯乙烯有順式和反式兩種構(gòu)型：
它們的大吸收波長和吸收強(qiáng)度都不同,，由于反式構(gòu)型沒有空間障礙,，偶 矩大，而順式構(gòu)型有空間障礙,，因此反式的吸收波長和強(qiáng)度都比順式的來得大,。為此就很容易區(qū)分順式和反式構(gòu)型了。
（3）互變異構(gòu)體的鑒別,。
在有機(jī)化學(xué)中,，會有異構(gòu)體的互變現(xiàn)象，通過紫外光譜也可鑒別,。
例7
異丙基酮有兩種分異構(gòu)體：
CH3CCH3CHCOCH3
CH2CCH3CH2COCH3
（a）
（b）
在紫外吸收光譜上,，由于（a）的分子結(jié)構(gòu)中碳碳雙鍵和羰基處于共軛體系，故在235nm處有強(qiáng)吸收（=12000）,，而（b）的分子結(jié)構(gòu)中的碳碳雙鍵和羰基不存在共軛體系,，故在220nm以上沒有強(qiáng)吸收。
例8
乙酰乙酸乙酯有酮式和烯醇式兩種變異構(gòu)體：
CH3COCH2COO C2H5
（酮式）
CH3COH··CHCCH2 HO
（烯醇式）
烯醇式結(jié)構(gòu)中羰基和主鏈的雙鍵共軛,，其雖an為245nm（邐18000）,，而酮式結(jié)構(gòu)中沒有共軛體系，故在210nm以上沒有強(qiáng)吸收帶,。在 性溶劑（例如水）中,，酮式結(jié)構(gòu)與溶劑分子因形成氫鍵而被穩(wěn)定，故在 性溶劑中以酮式結(jié)構(gòu)為主（約占85%）,，而在非 性溶劑（例如正乙烷 ）中,，烯醇式因生成分子內(nèi)氫而被穩(wěn)定，故在非 性溶劑中以烯醇式結(jié)構(gòu)為主,，在正乙烷溶劑中烯醇式結(jié)構(gòu)約占96%,。這種互變異構(gòu)的轉(zhuǎn)換情況在紫外光譜就很容易看出來。
4.6氫鍵強(qiáng)度的測定
實驗證明,，不同的 性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同,，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑,。
例9
在例6中提到的異丙基丙酮在溶劑環(huán)己烷（非 性溶劑）,、乙醇、甲醇和水中的雖an分 別為335,、320,、312和300nm。假定這種雖an由溶劑的氫鍵所引起,，則可以利用下式計算每種溶劑中的氫鍵強(qiáng)度,。對每種情況，紫外輻射每摩爾能量為
E=Nh=Nhc/ë
式中：N—阿佛加德羅常數(shù),，N=6.023×1023,；
h—普朗克常數(shù)，h=6.62×10-34J·s,；
c—光速c=3×1010cm/s
對于環(huán)已烷,，雖ax=335nm=33510-7cm；
因此 ,，紫外輻射能量N=（6.023×1023×6.62×10-34）/（335×10-7）=3. 57×105J/mol
同樣可求得乙醇,、甲醇和水中的紫外輻射能量分別為3.74×105、3.83×105、3.98×1 05J/mol,。將這些輻射能扣除在非 性溶劑中的輻射能后,，便得到在這些 性溶劑中的氫 鍵強(qiáng)度：
在乙醇中氫鍵強(qiáng)度為
3.74×105-3.57×105=1.7×104J/mol
在甲醇中3.83×105-3.57×105=2.6×104J/mol
在水中3.98×105-3.57×105=4.1×104J/mol
4.7絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定
金屬離子常與有機(jī)物形成絡(luò)合物，多數(shù)絡(luò)合物在紫外可見區(qū)是有吸收的,，我們可以利用分光光度法來研究其組成,。當(dāng)金屬離子M和配位體L（在這兒往往是顯色劑）形成絡(luò)合物ML時，絡(luò)合物反應(yīng)如下：
M+nR=MRn
當(dāng)達(dá)到絡(luò)合平衡時,，其絡(luò)合物穩(wěn)定常數(shù)為：
K=CMRn/（CMCR）
若M與R不干擾MRn的吸收,，且其分析濃度分別為CM、CR,，那么固定金屬離子M的濃度,，改變顯色劑R的濃度，就可以得到一系列CM/CR值不同的溶液,。在適宜的波長條件下測量 各溶液的吸光度,，然后以吸光度A對CM/CR 作圖。當(dāng)加入的試劑R還沒有使M定量轉(zhuǎn)化為M Rn時,，該曲線處于直線階段,，當(dāng)加入的試劑R已使M定量轉(zhuǎn)化為MRn。并稍有了過量時,，曲線 便出現(xiàn)轉(zhuǎn)折,，加入的R繼續(xù)過量，曲線又是水平直線,。那么轉(zhuǎn)折點所對應(yīng)的摩爾比數(shù)即是絡(luò)合物的組成比,。若絡(luò)合物比較穩(wěn)定，則轉(zhuǎn)折點明顯,。若絡(luò)合物不穩(wěn)定,，則轉(zhuǎn)折點不明顯，此時可用外推法求得兩條直線的交點,，交點對應(yīng)的CM/CR值即為絡(luò)合物MRn中的n值,。
如果在兩種不同的金屬離子和配位體總濃度（總摩爾數(shù)）的條件下，在同一坐標(biāo)上分別作吸光度對兩種不同總摩爾數(shù)的溶液組成曲線,，在曲線上找出吸光度相同的兩點,，則在此兩點上對應(yīng)的絡(luò)合物濃度應(yīng)相同，為此便可通過計算出絡(luò)合物穩(wěn)定常數(shù)K,。
4.8反應(yīng)動力學(xué)研究
借助于分光光度法可以得出一些化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù),，并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數(shù)據(jù)，得出反應(yīng)活化能,。在丙酮的溴化反應(yīng)的動力學(xué)研究中就是一個成功的例子,。
例10
在有機(jī)化學(xué)中,，丙酮的溴化反應(yīng)是一個復(fù)雜反應(yīng)，其反應(yīng)式為：
CH3COCH3 +Br2
CH3COCH2Br+Br-+H+
該反應(yīng)由氫離子催化,，則反應(yīng)速度為：
K=k［CH3COCH3］p［Br2］q［H+］r
式中：k—反應(yīng)速度常數(shù)
物質(zhì)的濃度（摩爾/升）
指數(shù)p,、q、r分別表示丙酮,、溴、氫離子的反應(yīng)ji數(shù)
在其它試劑沒有明顯吸收的波長下,，用分光光法在400nm處直接觀察Br2濃度的減小,，就很容易跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。對于固定的吸收池的厚度,，吸光度A就與Br2的濃度呈正比,，令比例系數(shù)為B，則存在下式：
A=BC
通過一系列的實驗,，便可得出反應(yīng)速度k及反應(yīng)ji數(shù)來,，實驗證明對Br2是零ji，即q等于零,。若測出兩個或兩個以上溫度的速度常數(shù)（k1,、k2），則可根據(jù)阿侖尼烏斯公式計算出反應(yīng)活化能來,。
Log k2/k1 =E0（T2/T1）/2.30 RT1T2
式中：k1,、k2分別為溫度T1、T2下的反應(yīng)速度常數(shù)
R為氣體常數(shù),，8.314焦耳/開爾文·摩爾
E0為活化能
4.9在有機(jī)分析中的應(yīng)用
有機(jī)分析是一門研究有機(jī)化合物的分離,、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測定的科學(xué)，它是在有機(jī)化學(xué)和分析化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的綜合性學(xué)科,。在國民經(jīng)濟(jì)的許多l(xiāng)ing域都用有機(jī)分析,。［3］
波長在190-800nm的電磁光譜對于判斷有機(jī)分子中是否存在共軛體系、芳環(huán)結(jié)構(gòu)及C=C,、C=O ,、N=N之類的發(fā)色團(tuán)是一個很好的手段。具有鵂繾蛹骯查釧幕銜鐫謐賢馇星 烈的吸收,，其摩爾吸光系數(shù)可達(dá)104-105（而紅外吸收光譜的摩爾吸光系數(shù)一般均小于10 3）,，因而檢測靈敏度很高。對于一些特列類型的結(jié)構(gòu),，可通過簡單的數(shù)學(xué)運算確定大吸 收,。如果發(fā)色團(tuán)之間不以共軛鍵相連的話，其紫外吸收具有可加性,，即總的吸收等于各單du發(fā)色團(tuán)的吸收之和,。用此性質(zhì)曾成功地推導(dǎo)出利血平及氯霉素的部分結(jié)構(gòu),。一個復(fù)雜分子的結(jié)構(gòu)，往往可以由比較化合物的紫外光譜性質(zhì)而推斷其含有何種發(fā)色團(tuán),，有時還能提供一些立體結(jié)構(gòu)及分子量的一些信息,，為未知物的剖析提供有用的線索。以下通過一些實例說明分光光度法在有機(jī)分析中的應(yīng)用,。
例11
氯霉素分子中的硝基shouxian是由它的紫外光譜而確定的,，在紫外光譜中298nm和278nm處 出現(xiàn)芳香硝基的特征吸收。
五圓環(huán)酮和羧酸酯的紅外特征吸收都在1740cm-1附近,，難以區(qū)別,。但在紫外光譜中只有前者在210nm以上有吸收，從而得以區(qū)別,。
例12
利用紫外分光光度法進(jìn)行定量分析時,，可將待測試樣的純品配制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液 ，事xian繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，由待測未知樣品吸光度對照標(biāo)準(zhǔn)曲線,，就可得到其含量。當(dāng)未知物樣品為幾種組分,，且這組分的雖ax互不重疊,，則可用聯(lián)立方程解之。如復(fù)方阿司匹林（ A.P.C）含有三種組分：阿司匹林（A）,、非那西?。≒）、咖啡因（C）,，阿司匹林和咖啡因的大吸收在277nm和275nm,，較為接近，bi須事xian分離,，而咖啡因和非那西丁的大吸收相距較 遠(yuǎn),，可用聯(lián)立方程解之。將待分析的藥片粉碎并溶于氯仿中,，用4% 的碳酸鈉水溶液萃取兩次,，用蒸餾水洗滌一次，合并水層,。則阿司匹林進(jìn)入水層,，非那西丁和咖啡困留在氯仿中。再用氯仿洗滌水層三次,，進(jìn)一步提取水層中殘留的非那西丁和咖啡因,。合并氯仿層，并過濾到250mL容量瓶中,，用氯仿稀釋至刻度,。后移取1mL此液到100mL容量瓶中,，用氯仿稀釋至刻度。取此液在250nm和275nm處測定吸光度,。分別測得為0.795和0.280,。水層用稀酸酸化（p H為2），用氯仿萃取后,，將萃取液轉(zhuǎn)入100mL容量瓶,，以氯仿稀釋至刻度，在277nm處測其吸 光度為0.78,。通過配制的已知濃度的樣品可求出100mg/L的阿司匹林在277nm處的吸光度為0. 72,，可知待測樣品中的阿司匹林的含量為100×0.78/0.72=108mg/L，也就是10.8mg/100mL,，即藥片含阿司匹林10.8g,。對標(biāo)準(zhǔn)的非那西丁溶液,，測得其比吸光系數(shù)為k250=0.0767 L/mg.cm,k275=0.0200L/mg.cm對標(biāo)準(zhǔn)的咖啡因溶液,，測得其比吸光系數(shù)為k250 =0.0177L/mg.cm,k275=0.0518L/mg.cm由此可列出聯(lián)立方程，解得咖啡因濃度為1 .55mg/L,，即0.155mg/100mL非那西丁濃度為10.1mg/L,即1.01mg/mL,，由于未知溶液稀釋了250倍，所以藥片中含非那西丁的量為1.01×250=252mg,，含咖啡因的量為0.155×2 50=38.8mg,。
同樣，甲苯酚中的甲基和羥基因位置不同有鄰,、間,、對三種異構(gòu)體，它們有各自不同的吸收譜帶,，可分別在波長277,、273、268nm處測定光度,，解聯(lián)立方程即可算出混的中各自組分的含量,。
例13
通過對兩個有機(jī)化合物（以環(huán)已烷為溶劑）的紫外光譜比較，發(fā)現(xiàn)（Ⅱ）的紫外光譜中26 0nm處的吸收峰與（Ⅰ）的相比大為減弱,，從而表明空間位阻效應(yīng)的存在,。這是由于有機(jī)化合物（Ⅱ）中分子中心單鍵的鄰位上有了兩個體積較大的取代基（甲氧基），使兩個苯環(huán)以中心鍵為軸,，發(fā)生扭曲而不能處于同一個平面內(nèi),，此時共軛關(guān)系受到很大影響，故使反應(yīng)苯環(huán)下鍵為特征的260nm處的吸收就大大減弱了,。
例14
在有機(jī)化合物（Ⅲ）中,，由于兩個苯環(huán)上相互處于鄰位的四個甲基的位阻效應(yīng),，使得 兩個苯環(huán)不能處于同一個平面內(nèi)，其間的共軛關(guān)系被破壞,。反映在其紫外光譜上,，此化合物的紫外光譜很近似地等于兩個孤立的間*苯?
光譜之和， 而與二聯(lián)苯?
的吸收光譜無關(guān),。
例15
制備衍生物也是擴(kuò)大紫外光譜應(yīng)用范圍的一個途徑,。我們可以利用紫外光譜測定有機(jī) 物胺類化合物（RNH2）的分子量。RNH2本身在紫外區(qū)是沒有吸收的,，但可以利用化學(xué)反應(yīng)制備衍生物,，引入一個新的共軛系統(tǒng)。
反應(yīng)產(chǎn)生的胺苦味酸鹽（1+1加成產(chǎn)物）在紫外有吸收,。當(dāng)波長為380nm時,，大多數(shù)的胺苦味酸鹽在95%乙醇中的摩爾吸光度系數(shù)大致相同，均在1.344×104,，因此我們就可以從苦味酸鹽的乙醇溶液在380nm處的吸收,，由公式計算出胺苦味酸鹽的分子量，進(jìn)而再折成未知胺的分子量,。
例如,，用此方法測定古柯堿的分子量，將古柯堿苦味酸鹽2.159mg溶于100mL95%乙醇溶液中,，在1厘米厚吸收池中測得其吸光度為0.550,，又知苦味酸的分子量為229，這樣就可 以計算出古柯堿的分子量為
M=13440×2.519×10/（1000×0.550）-229=299
按古柯堿分子式（C11H21O4N）計算的話,，其分子量應(yīng)為303,，與此法計算出的分子量的偏差僅為-0.8%。
用此方法測定各類化合物的衍生物及分子量的有關(guān)數(shù)據(jù)如表1所示,。
表1
分光光度法測各類化合物分子量的數(shù)據(jù)
化合物衍生物雖ax（nm）Emax
胺苦味酸鹽38013440
飽和醇-2,4二硝基苯丙酸酯24214440
醛和酮2,，4二硝基苯腙36022000
糖脎39720360
乙醇分子中不存在共軛系統(tǒng)，它在波長200-800nm范圍內(nèi)是沒有吸收的,，當(dāng)乙醇與異氰酸苯酯（Ar-N=C=O）反應(yīng)后,，在波長280nm處就會出現(xiàn)較強(qiáng)的吸收。
例16
有時很強(qiáng)的吸收會引起干擾作用,，象有些稠環(huán)化合物對某些波長的吸收就很強(qiáng),，也可 以采用化學(xué)鴟從θコＨ纈謝銜鏍煬哂腥齟箴鍵,，在波長252nm處有很強(qiáng)的吸收,，其摩爾吸光系數(shù)可達(dá)2×105會對一些在此也有吸收的化合物產(chǎn)生干擾，我們可以讓它與丁烯二酸酐發(fā)生狄爾斯-阿爾德（Diels-Alder）加成反應(yīng)：
這樣一來,，原來三個大鵂查釹低塵捅黃蘋盜?，原先很强的吸收就被大大架V趿恕£
結(jié)語
所述紫外可見分光光度法具有儀器價格低廉適用性廣泛,，尤其是采用微機(jī)控制以來，該技術(shù)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展,。近年來我國儀器制造廠可以生產(chǎn)出與等同水平的紫外分光光度計,，成為分析者的佳選擇
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