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1,、 前言說明
衣原體是一種不能運(yùn)動的革蘭氏陽性菌,，同時也是一種強(qiáng)制性的胞內(nèi)寄生菌,，而且這種細(xì)菌可在其寄主細(xì)胞的胞漿內(nèi)形成明 顯的包涵體,。這種包涵體在光學(xué)顯微鏡下很容易看到,。目前人們知道有三種不同的衣原體對人具有至病性,，它們是：沙眼衣原體,、肺炎衣原體和鸚鵡衣原體，還有一 種對動物具有至病性的衣原體（獸類衣原體）,。沙眼衣原體是世界上性傳播疾病zui流行的傳播因子（4000-5000萬例）,，并且此傳染病的數(shù)量還在不斷增 加。感染了沙眼衣原體的孕婦可以在分娩時將病毒傳染給胎兒,，從而導(dǎo)致胎兒患結(jié)膜炎或肺炎,。 衣原體感染不治療的個體會導(dǎo)致慢性輸卵管炎，并且很有可能出現(xiàn)宮外孕或不孕,。在男性中,，沙眼衣原體是導(dǎo)致非淋球菌性尿道炎的主要因素。在衣原體感染中,，頻 繁性的無癥狀隱性階段是一個很嚴(yán)重的問題,，因為它可能啟動慢性疾病。在許多例子中,，原發(fā)性感染都沒有被發(fā)現(xiàn),，之后只能檢測到由持續(xù)上升病原體而引起的后遺 癥。
種類 感染機(jī)制 疾病 診斷方法
沙眼衣原體 直接傳播或性傳播：主要感染部位是眼或泌尿生殖道黏膜 淋巴性肉芽腫,，沙眼,，新生兒或成年包涵體性結(jié)膜炎，宮頸炎,、輸卵管炎,、尿道炎、附睪炎,、直腸炎及新生兒肺炎,。 血清學(xué)
肺炎衣原體 呼吸道黏膜浸潤 呼吸道疾病
有爭議的疾病：心內(nèi)膜炎,，冠心病
心臟病 PCR
鸚鵡衣原體 吸入受染禽類的糞便,；接觸了受染禽類的內(nèi)臟。 飼鳥?。W鵡熱） 鏡檢

可通過以下方法來檢測是否感染：
n 鏡檢：Giemsa染色
n PCR
n 血清學(xué)：用ELISA檢測抗原
用IF,、EIA或ELISA檢測抗體
2、應(yīng)用范圍
IBL公司的肺炎衣原體IgM ELISA試劑盒可用于人血清中抗肺炎衣原體IgM抗體的定性檢測,。
3,、實驗原理
抗肺炎衣原體IgM抗體的定性免疫酶檢測利用的是ELISA技術(shù)。包被板上預(yù)先包被了能結(jié)合樣本中相關(guān)抗體的肺炎衣 原體抗原,。洗板以除去未結(jié)合的樣品物質(zhì),，之后加入辣根過氧酶標(biāo)記的抗人IgM。之后,，酶標(biāo)物會結(jié)合到捕獲的肺炎衣原體特異性抗體上,，加入能產(chǎn)生藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn) 物的TMB底物液后,，如果顯示藍(lán)色則可知已形成免疫復(fù)合物,。所顯示顏色的強(qiáng)度與樣品中肺炎衣原體特異性IgM抗體的量成正比,。加入硫酸以終止反應(yīng),以便產(chǎn) 生黃色的終點(diǎn)顏色。用一酶標(biāo)儀在450m處讀取OD值,。
4,、材料
4.1試劑盒成分
1） 肺炎衣原體包被板（IgM）：12×8，可拆,，微孔中包被了肺炎衣原體抗原,，真空密封。
2） IgM樣本稀釋液：1瓶,，100ml,，用于樣品的稀釋，內(nèi)含抗人IgG,，PH為7.2±0.2,，即用，綠色白蓋,。
3） 終止液：待用硫酸,，1 瓶，15ml,，內(nèi)含硫酸,，0.2mol/l，紅蓋,。
4） 濃縮洗滌液（20X）：1瓶,，50ml，PH為7.2±0.2 ,，白蓋,。
5） 肺炎衣原體抗IgM酶標(biāo)物：1瓶，20ml,，內(nèi)含過氧化物酶標(biāo)記的兔抗人IgM,，紅色黑蓋。即用,。
6） TMB底物液,，1 瓶，內(nèi)含TMB,，黃蓋,，15ml，即用,。
7） 肺炎衣原體IgM陽性質(zhì)控,，1 瓶 ,，黃色液體，2ml,，紅蓋
8） 肺炎衣原體IgM臨界質(zhì)控,，1 瓶 ，黃色液體,，2ml,，綠蓋
9） 肺炎衣原體IgM陰性質(zhì)控，1 瓶 ,，黃色液體,，2ml，藍(lán)蓋
4.2 實驗所需材料和器材
1） 酶標(biāo)儀,，可在450/620測吸光度值
2） 37℃孵化器
3） 手工或自動微孔清理設(shè)備
4） 10µl和1000µl的取樣吸頭
5） 旋渦混合器
6） 去離子水或蒸餾水
7） 試管
8） 記時器
5．樣本貯藏和準(zhǔn)備：
5.1用人血清做為樣本,。如果檢測在樣品收集后24小時內(nèi)進(jìn)行，則樣品應(yīng)當(dāng)存放與2-8℃的環(huán)境下,；否則應(yīng)當(dāng)將其貯存于-70℃—20℃的環(huán)境下,。如果樣品被凍存過，則在檢測之前應(yīng)小心解凍樣品,，避免反復(fù)凍溶,。
5.2樣品的稀釋
檢測前，所有的每樣品都應(yīng)按1：100的比例當(dāng)用IgM樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,。在10µl樣品中加入1ml IgM樣品稀釋液,，旋渦混合器上*混合。陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控不需要稀釋,，待用,。
6．實驗步驟：
實驗開始之前仔細(xì)閱讀操作步驟，嚴(yán)格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實驗結(jié)果,。如果這實驗是在ELISA自動系統(tǒng)上進(jìn) 行,，為了避免洗板的影響，我建議在洗板步驟時,，洗板3次改成洗板5次,，洗滌液從300µl增加到350µl。實驗開始之前,，應(yīng)當(dāng)在試劑盒提供的結(jié)果單上標(biāo) 記好所有的樣品和質(zhì)控品,。取適當(dāng)數(shù)量的板條置于板架上。
請至少做以下幾個孔：
1孔（例A1）做空白對照孔
1孔（例B1）做陰性質(zhì)控
2孔（例C1+D1）做臨界質(zhì)控
1孔（例E1）做陽性質(zhì)控
如果有必要的話,，我們建議您質(zhì)控和病人樣品做雙份檢測,。照說明書給出的實驗步驟進(jìn)行操作，并避免不同步驟之間的時間隔無明顯差別,。加每一質(zhì)控品和樣品時都應(yīng)當(dāng)用新的取樣吸頭,。把恒溫箱調(diào)至37 ± 1℃
1） 加100µl質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中,，留A1孔做空白。
2） 蓋板
3） 37℃±1℃下溫育60+5分鐘,。
4） 溫育之后,，移去粘性金屬板，棄去孔內(nèi)反映液,，用300µl洗滌液洗板3次,，每次洗板循環(huán)間的時間間隔應(yīng)大于5秒，并在吸水紙上拍干,。
注意：洗板很重要，如果洗板不充分,，則檢測結(jié)果會不,，而且會錯誤的提高OD值。
5） 除空白孔外,，加100µl 肺炎衣原體抗IgM酶標(biāo)物于各孔中,，蓋板。
6） 37℃±1℃下避光溫育30+2分鐘,。,。
7） 重復(fù)步驟4。
8） 每孔加100µl TMB底物液,。
9） 室溫避光溫育30分鐘,。
10） 以加底物一樣的順序和速度在每孔中加入100µl終止液。
11） 30分鐘內(nèi)在450nm讀吸光度,。
7．結(jié)果判定：
1）必須符合以下條件, 實驗結(jié)果才能成立.
空白孔A1：OD＜0.100
陰性質(zhì)控孔B1：OD＜0.200
臨界質(zhì)控孔C1和D1：OD值界于0.250---0.900
陽性質(zhì)控孔E1：OD大于或等于臨界
2）結(jié)果計算：cut-off值是臨界質(zhì)控檢測結(jié)果的平均值
例如：臨界質(zhì)控OD值1.44+臨界質(zhì)控OD值0.42=0.86/2=0.43
Cut-off值=0.43
3）結(jié)果解釋：
如果樣品的OD值比cut-off值高10%以上則認(rèn)為此樣品呈陽性
如果樣品的OD值在比cut-off值高或低10%的范圍內(nèi),，則認(rèn)為次樣品是可疑的。（灰色區(qū)域）建議2-4周后用新鮮樣品重復(fù)檢測,，如果結(jié)果仍位于灰色區(qū)域內(nèi),，在認(rèn)為此樣品為陰性。
如果OD值比cut-off值低10%以上則認(rèn)為此樣品呈陰性,。
4）實驗結(jié)果的單位
= [Units = U]
病人的（平均）OD值x 10

Cut-off值
= 28 U （ Units）
例如：1.204 x 10

0.43
臨界值：10U
灰色區(qū)域：9-11U
陰性：＜9 U
陽性：＞11 U
本譯文僅供參考,，詳情請以原文為準(zhǔn)。