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染色就是利用染料在組織切片上給與顏色,，使其與組織或細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用,，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射,，使其各種微細(xì)結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色,，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細(xì)胞的各種成分,。染色劑與組織細(xì)胞相結(jié)合而使組織細(xì)胞著色的過程與物理和化學(xué)作用兩者都有關(guān)系,。
一.染色的物理現(xiàn)象
1.溶解性：
這種染色zui典型的例子就是脂肪染色,，蘇丹類染色劑為脂溶性染料,，它可以被脂質(zhì)溶解，使脂質(zhì)著色,，就是利用染色劑在脂質(zhì)中的溶解度大于在酒精等溶劑中的溶解度這一特性,。因此，當(dāng)蘇丹類的酒精溶液與組織細(xì)胞中的脂質(zhì)接觸時(shí)，染色劑就從溶液中“轉(zhuǎn)移”到脂質(zhì)中去,，而使脂質(zhì)著色,。
2.吸附作用：
較大物體有從周圍介質(zhì)吸附小顆粒到自身的特性。有些染色則是染色劑分子通過滲透和毛細(xì)管作用而被吸收或沉淀到組織,，細(xì)胞的小孔中去而著色的,。例如活性炭吸附各種分子，甚至膠質(zhì)和微生物等較大的顆粒一樣,。
二.染色的化學(xué)反應(yīng)
酸性染料和堿性染料的染色作用常是對(duì)立的,，而不是一致的。任何染料均可電離,，離解出陽離子或陰離子,。酸性染料中的酸性部分有染色作用的是陰離子；堿性染料中的堿性部分有染色作用的是陽離子,，細(xì)胞內(nèi)同時(shí)含有酸性和堿性物質(zhì),，酸性物質(zhì)與堿性染料中的陽離子相結(jié)合，如細(xì)胞核（含有核酸）黏液和軟骨基質(zhì)呈酸性部分被鹽基性染料蘇木素所染,、反之堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子相結(jié)合,，如細(xì)胞漿及其內(nèi)部的某些顆粒物質(zhì)被酸性染料伊紅所染。染料的顏色基不是在陽離子,，就是在陰離子上,，這些離子將因組織反應(yīng)不同而發(fā)生化學(xué)結(jié)合，如顯示含鐵血黃素的普魯士蘭反應(yīng)是zui典型的例子,。但是,，大量染色的化學(xué)反應(yīng)并不象鐵反應(yīng)那樣明確，實(shí)際情況遠(yuǎn)為復(fù)雜,。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子是個(gè)分子量自幾萬至幾百萬的大分子,，每個(gè)分子中含有很多陽離子和陰離子基因，在等電點(diǎn)時(shí)能形成游離的兩性離子,，如：

P為蛋白質(zhì),，是具有兩性的膠體物質(zhì)。它呈酸性或堿性與環(huán)境的PH值有關(guān),，如溶液的PH值小于該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)則此溶液對(duì)該種蛋白質(zhì)即為酸性,，蛋白質(zhì)就帶正電，將被酸性染色劑所著色,。反之,，溶液的PH值大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，則此溶液對(duì)該蛋白質(zhì)來說即為堿性,蛋白質(zhì)帶負(fù)電,，將被帶有陽離子的染色劑所浸染 ,。
在日常工作中,，長久固定于甲醛的組織切片，往往染色不良,，尤其是核的著色欠佳,。這是因?yàn)楣潭ㄒ杭兹┭趸杉姿幔M織亦隨之變?yōu)樗嵝?，所以不易被蘇木素所著色,，補(bǔ)救的辦法是，先用流水沖洗組織塊,，然后用堿性溶液如稀氨酒精等處理使之中和,，恢復(fù)正常PH值后再進(jìn)行染色。
大多數(shù)染色的原理至今仍未搞清楚,。有些可能是物理的,，有些可能是化學(xué)的，有些則可能兩種機(jī)制都起作用,，正因?yàn)槿藗儗?duì)染色的原理還沒有*掌握,，所以目前還不能很好地運(yùn)用原理來控制它。在相當(dāng)程度上要憑借工作經(jīng)驗(yàn),。因此“染色”成為技術(shù)性很強(qiáng)的一項(xiàng)工作,。在進(jìn)行每一種染色方法時(shí),，必須注意不斷地有意識(shí)地去積累經(jīng)驗(yàn),，從成功與失敗中去真正掌握該染色技術(shù)。
三．進(jìn)行性染色和退行性染色
組織成分著色由淺至深,，當(dāng)達(dá)到所需要的強(qiáng)度時(shí),，終止染色。這種方法稱為進(jìn)行性染色,。一般所采用的染液濃度較低,，染色過程中應(yīng)該不時(shí)在鏡下觀察以進(jìn)行控制，這樣才能得到染色強(qiáng)度適中的效果,。此種方法無需“分化”,，例如，卡紅染色,。
退行性染色,，則是先把組織濃度過度，超過所需的程度,，然后再用某些溶液脫去多余的染色劑,，以達(dá)到適當(dāng)?shù)纳疃龋⑹共粦?yīng)著色的組織細(xì)胞脫色,，這個(gè)步驟稱為“分化”,。在分化中進(jìn)行鏡下觀察,，當(dāng)然也是*的。H.E染色中用蘇木素染核就是退行性染色,。
四．直接染色,，間接染色和媒染劑
有些染色無需第三種物質(zhì)參加，染色劑和組織即可直接結(jié)合著色,，是為直接染色,。直接染色zui后達(dá)到的深度與染液的濃度和組織細(xì)胞對(duì)染色劑的親和力相關(guān)。還有一些染色,，單獨(dú)燃料本身的水溶液或酒精溶液,，幾乎不能與組織細(xì)胞結(jié)合或結(jié)合的能力很弱，必須有第三種成分——媒染劑參與,，才能使染色劑與組織細(xì)胞有效地結(jié)合起來,，這種染色方法稱為間接染色。
媒染劑通常是雙價(jià)或三價(jià)金屬如鋁,，鐵的硫酸鹽或氧化物,。媒染劑有的加在染液中，媒染作用在染色的同時(shí)進(jìn)行（如Ehrlich氏蘇木素染色）,；有的則用于染色前,，媒染劑單獨(dú)配成溶液，固定液本身就起著媒染的作用（如Wallory氏磷鎢酸蘇木素染色用Zenker或 Helly氏固定）,；有時(shí)則用于染色后,。媒染劑在染色中起著架橋作用，既能與染料結(jié)合又能與組織相結(jié)合,，達(dá)到了促進(jìn)染色的效果,。例如蘇木素就需要明礬作媒染劑，才能使組織著色,。媒染劑往往在一些間接染色反應(yīng)中幾乎是*的,。
五．促染劑
用以加強(qiáng)染料和組織細(xì)胞結(jié)合能力的物質(zhì)稱為促染劑。如染胞漿時(shí)伊紅液中滴加的冰醋酸,，有加強(qiáng)其染色作用,，增加了有色酸對(duì)蛋白質(zhì)堿基的結(jié)合力。促染劑與媒染劑不同,，有時(shí)為了加快染色過程,，可在染液中加入接觸劑促進(jìn)染料與組織細(xì)胞著色，但其本身并不參與染色反應(yīng),。
促染劑有如化學(xué)反應(yīng)中的催化劑,，少量存在就有明顯的促染作用。它們的作用機(jī)制也許是降低表面張力或是改變了染液的PH值.
六．分化劑
在退行性染色中,，附在組織細(xì)胞上多余的染色劑需用某些特定的溶液把目的物以外的部分脫去,，從而使目的物與周圍組織形成鮮明的對(duì)比,，同時(shí)使目的物本身的色澤也深淺適當(dāng)。這種選擇性地除去多余染色劑的過程稱為“分化”,，所使用的溶液即是“分化劑”,。
分化劑大致可歸納為三大類：
（一）酸性分化劑：如冰醋酸和鹽酸。它們能與媒染劑（金屬）相結(jié)合形成可溶性鹽類,，從而打開了媒染劑和組織細(xì)胞的結(jié)合,，使組織細(xì)胞脫色，另外,，它能分解和防止形成染料的沉淀色素,。如Ehrlich氏蘇木素液當(dāng)酸性時(shí)，溶液為褐紅色,，正是由于色素根來與鋁化合成蘭色的“沉淀色素”,，之故，一旦將切片投入堿性溶液,，則組織立刻呈現(xiàn)藍(lán)色,，說明沉淀色素已經(jīng)形成，但若以1%鹽酸酒精分化,，則又恢復(fù)了紅色,，此即表示沉淀色素又被溶解。
（二）氧化分化劑：其作用實(shí)際上是種簡單的漂白,，如苦味酸,，鉻酸，重鉻酸鉀,，高鐵氰化鉀和過錳酸鉀等,，這些都是一些氧化劑，可將組織上所有的染色劑無選擇地氧化而呈無色,，猶如漂白作用。但由于這種氧化作用的速度較慢,，首先脫去的必是染色較淺的,，染色較深的組織細(xì)胞還可保留部分染色劑，這樣就達(dá)到了分化的效果,。
（三）媒染分化劑：媒染劑能促使組織細(xì)胞和染色劑相結(jié)合,。如果將已染色的切片再放到媒染劑的溶液中，則可使已經(jīng)和組織相結(jié)合的染色劑脫去,，這是媒染劑的另一種功能,。從這個(gè)角度看，又可稱之為“媒染分化劑”,。它對(duì)組織既能使染料附著,，又能脫去染料,，二者初看似乎矛盾，其實(shí)不然,，這是因?yàn)槿旧珓┖兔饺緞┑谋壤P(guān)系不同,，當(dāng)溶液中媒染劑的量超過了染色劑的量時(shí)，占有壓倒優(yōu)勢(shì)的媒染劑就把已經(jīng)和組織細(xì)胞相結(jié)合的染色劑奪取過來,，使組織細(xì)胞脫色,，即為分化現(xiàn)象。當(dāng)然,，含染料較少的組織必然先被脫色,，而著色較濃的組織隨著分化時(shí)間的控制，即可保留必要的顏色,，從而達(dá)到分化的目的,。
既然分化劑有脫色的作用，因此分化劑本身也是脫色劑,。一張褪色的切片,，需要再染時(shí)，*步就是用脫色劑加以處理,。在常規(guī)染色中,，分化劑必須嚴(yán)格掌握，再根據(jù)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行鏡下觀察,，控制染色效果,。
七.變色反應(yīng)和正色反應(yīng)
大多數(shù)染料可將組織染成同一顏色的不同深度；例如：酸性品紅總是將組織染成不同色調(diào)的紅色,。淡綠染成不同色調(diào)的綠色,。這些染色反應(yīng)zui后目的所呈現(xiàn)的顏色和染色劑的顏色相同，稱為正色反應(yīng),。然而有些組織成份可被煤焦類,，某些堿性染料染成與染料不同的另一種顏色；如黏液用甲苯胺藍(lán)可染成紅色,，而其余組織則染成不同色調(diào)的藍(lán)色,。此種染色反應(yīng)zui后目的物所呈現(xiàn)的顏色和染色劑當(dāng)初的顏色不同，則稱為變色反應(yīng),。也叫做異染現(xiàn)象,。這種組織稱為顯示異染性，這種染料叫做異染染料,。顯示異染現(xiàn)象的主要組織成分有黏液,，軟骨和肥大細(xì)胞顆粒