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1,。定義 在真核細胞中絕大多數(shù)的mRNA前體在離開細胞核之前轉(zhuǎn)變成成熟的mRNA，此加工過程是在被稱為拼接體的核糖核酸蛋白復合物中進行的,。其主要成分是小核糖核蛋白（snRNPs）和大量的附加蛋白質(zhì)因子,。SnRNPs的結(jié)構(gòu)和功能已經(jīng)很明確，但對hnRNPs了解不多,。RNase處理核抽提物,，經(jīng)蔗糖梯度離心在、40S處可得到一些顆粒成分,。在這些顆粒成分中除了mRNA前體片段外,，包含了大約30種不同的能被hnRNPC蛋白單克隆抗體識別的蛋白。因此,，所有能被hnRNP單抗沉淀的蛋白質(zhì)被命名為hnRNP蛋白,。根據(jù)它們分子量和雙向電泳中的遷移為特征用字母序號命名為hnRNP-A1（34kD）到hnRNP-U（120kD），其中hnRNP A和B（hnRNPA／B）蛋白推測可能是從同一基因編碼得來的一組高度相關(guān)蛋白質(zhì),。
2．天然抗原與重組抗原的特性 A1抗原是*個克隆并在細菌中表達的hnRNP蛋白,。大多數(shù)有關(guān)這一蛋白結(jié)構(gòu)、功能和抗原性的資料是從重組體中得到的,。雖然有關(guān)hnRNPA2重組蛋白的資料很少,，但有很好的跡象表明重組蛋白的表現(xiàn)與其天然產(chǎn)物在本質(zhì)上沒有多大區(qū)別。
3．起源和細胞定位 hnRNP蛋白在進化過程中是非常保守的蛋白,，似乎存在于所有的脊椎動物的細胞和組織中,，果蠅細胞中也存在幾種與脊椎動物hnRNPA／B相似的蛋白。hnRNP蛋白主要是定位于富含蛋白的細胞核中,。其功能為包裝和加工RNA前體,。有證據(jù)表明hnRNP A／B蛋白在剪接中起重要的調(diào)節(jié)作用。此外,，這些蛋白可在核與胞漿間穿梭,，推測可能與mRNA的轉(zhuǎn)運有關(guān)。
4．純化的方法 hnRNP蛋白zui初由HeLa細胞分離得到,，但其他快速生長的細胞（人類）株（例如MOLT-4 orJurkat）也是很好的來源,。采用肝素—瓊脂糖親和層析一步法可簡單,、快速獲得半純化的hnRNP A／B。簡要地說,，核抽提物在20 mmol／LHepes,，0．3mmol／L NaCl pH 7．9的肝素瓊脂糖凝膠層析介質(zhì)結(jié)合，先用緩沖液洗柱,，然后用20mmol／L Hepes,，lmmol／L NaCl pH7．9洗柱，zui后用含6mmol／L尿素的同樣的緩沖液洗脫,。尿素洗脫液內(nèi)含約為20倍濃集的hnRNP蛋白,。該方法純化的hnRNP蛋白主要是兩種hnRNP-A，hnRNP-B含量較少,。隨后采用弱陽離子交換介質(zhì)CM-瓊脂糖凝膠進行離子交換層析,，可獲得高純度的hnRNP-A2。然而,，這種純化的蛋白在水樣的緩沖液中幾乎是不溶的,，溶解它要加入6mmol／L的脲或1％SDS。hnRNP-A1的純化是用苯瓊脂糖疏水交換層析,。作為選擇,，也可用單鏈DNA親和層析或密度梯度離心。然而對大規(guī)模的純化不推薦后一種方法,。
5．序列信息 hnRNP-A1和hnRNP—A2的分子量分別為34kD和36kD,。兩者都是堿性蛋白質(zhì)，其等電點分別為8．4和9．0,，在體內(nèi)以部分磷酸化的形式存在。兩種蛋白高度相關(guān)并且N末端氨基酸有80％以上相同,。它們含有兩個保守的RNA結(jié)合區(qū)域（RBD）,，也叫做RNA識別序列（RRM），在C—末端接著一個富含甘氨酸的片段,。hnRNP-B1與hnRNP-A2除了前者在N末端剪切插人了一個12氨基酸的片段以外,，其他*一致。有關(guān)hnRNP-B2的結(jié)構(gòu)目前仍不知,。由于抗hnRNP-A2／RA33抗體與兩種hnRNPB蛋白存在廣泛的交叉反
應,，因而推測hnRNP-B2可能是mRNA前體在成熟過程中剪切產(chǎn)生。此外有報道hnRNP-A1的一段剪切變體（hnRNP-Alb）僅僅是在C末端有50個氨基酸的插入順序,，編碼hnRNP-A1和hnRNP-A2的基因有相似的結(jié)構(gòu)等等均說明可能是來自于同源基因,。
到目前為止，有關(guān)hnRNP A／B蛋白資料表明,，主要的抗原表位定位于N末端,，此類區(qū)域含有兩個RBD區(qū)域,。
所有的hnRNPA／B蛋白的特點是都具有同樣的分子結(jié)構(gòu)：N—末端含有兩個毗鄰的保守的RNA結(jié)合域（RBD），與大多數(shù)RNA結(jié)合域一樣大約為80個氨基酸組成,。黑色條帶代表了每條RBD的兩個zui保守的序列,。C—末端叫輔助域，含有約50％的甘氨酸殘基并與其他富含甘氨酸（如膠原蛋白,、角蛋白或EBNA—1）酌結(jié)構(gòu)相一致,。hnRNP-B1蛋白除了接近N末端的由選擇性剪切產(chǎn)生的12個氨基酸的插入片段以外其他與hnRNP-A1*一致。hnRNP-B2的基本結(jié)構(gòu)還不知,，但可以假設是hnRNP-A2另一個選擇性剪切結(jié)構(gòu),。hnRNP-A1與hnRNP-A2 N—末端中有80％以上的序列相似，富含甘氨酸區(qū)域處大約有40％的序列相似,。選擇性的剪切變體hnRNP-Alb,，在其富含甘氨酸的輔助區(qū)有50個氨基酸插入片段。自身抗體的反應似乎是直接針對抗原的N—末端,。hnRNP-A2的含有完整的RBD H結(jié)構(gòu),，攜帶很多抗原信息的抗原決定簇結(jié)構(gòu)zui近已獲得鑒定。