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抗絲集蛋白（角蛋白）抗體自身抗原
2011-9-3 閱讀(1067)
1．定義 由于角蛋白（或細(xì)胞角蛋白）是角質(zhì)層的主要蛋白成分,，所以RA患者血清中與大鼠食管反應(yīng)的特異性抗體被稱之為“抗角蛋白抗體”,。盡管對其特異性缺乏免疫化學(xué)的證實,，至少有四個特點表明人上皮細(xì)胞的角蛋白不是AKA的靶抗原：①用兔抗人上皮細(xì)胞角蛋白抗體與RA血清預(yù)反應(yīng)后再作用于大鼠食管的冷凍組織切片,，不能消除或降低RA血清與角質(zhì)層的反應(yīng),；②用人表皮細(xì)胞角蛋白預(yù)吸收處理RA血清,，不能緩解RA血清隨后與大鼠食管角質(zhì)層的反應(yīng),；③采用ELISA測定抗人表皮細(xì)胞角蛋白天然IgG型抗體的滴度與RA血清中AKA的滴度*不一致,，如果以大鼠食管上皮提取的細(xì)胞角蛋白為抗原檢測則不是這種情況；④RA血清與取自于大鼠食管上皮細(xì)胞或角質(zhì)層的角蛋白免疫印跡反應(yīng)呈微弱或無的反應(yīng),。
從AKA陰性及RA患者表皮中,，通過免疫學(xué)方法提取出一種40kD的蛋白，通過肽譜分析,，確認(rèn)為是堿性絲集蛋白的一種中性／酸性同分異構(gòu)體：①特異性的抗絲集蛋白的單克隆抗體能與40kD蛋白質(zhì)反應(yīng),；②以40kD蛋白質(zhì)作為抗原，從RA血清中通過親和層析純化出的自身抗體與純化的絲集蛋白發(fā)生免疫反應(yīng),；③用純化的絲集蛋白免疫吸附RA血清后,，RA血清就不再與40kD蛋白質(zhì)反應(yīng)；④40kD蛋白質(zhì)和絲集蛋白有相似的氨基酸組成,；⑤從免疫吸附試驗看出,，AKA和抗40kD蛋白質(zhì)抗體在很大程度上是相同的。
表皮絲集蛋白是一種分子量為37 000的帶正電荷的蛋白質(zhì),。在上皮的顆粒層被合成其前體—前絲集蛋白,，并儲存在角質(zhì)層的小顆粒中．它是一種高度磷酸化的多聚蛋白，由肽段接頭連接由前后排列的重復(fù)絲集蛋白單位組成,。在后來的分化階段,，前絲集蛋白去磷酸化并水解成為功能性堿性絲集蛋白分子。絲集蛋白和前絲集蛋白都富含堿性氨基酸和絲氨酸,，不含蛋氨酸和含硫氨基酸,。因含有11％一12％的組氨酸，而曾被稱為“富組氨酸蛋白”,。在完成了在細(xì)胞角蛋白線狀物聚集的功能之后,，絲集蛋白的精氨酸殘基被肽精氨脫氨酶作用修飾為中等酸性殘基從而降低了對細(xì)胞角蛋白的親和力。
表皮絲集蛋白具有兩種功能：一是在底層角化細(xì)胞中,，堿性絲集蛋白相互作用并將細(xì)胞角蛋白線性物裝配成巨纖絲,。二是促成細(xì)胞角蛋白間二硫鍵的形成,。這些密集包裹的線性物和絲集蛋白形成角化細(xì)胞的細(xì)胞基質(zhì)。除在上層的角化細(xì)胞中,，在線性物間作為聚集蛋白之結(jié)構(gòu)外，絲集蛋白*被蛋白水解成游離氨基酸及其衍生物如尿酸和吡咯烷羧酸,。這些角化層表層的高濃度成分在保持高滲透壓和吸收紫外光方面起關(guān)鍵作用,。zui后，絲集蛋白的第三種功能即它是角化屏障的前體,。
2．來源 目前,，絲集蛋白和其中性／酸性同分異構(gòu)體及其前絲集蛋白尚無商業(yè)化產(chǎn)品。
和前絲集蛋白相關(guān)的大鼠食管上皮分子不同,，用不同的一維二維電泳技術(shù)分離的大鼠食管上皮的各種提取物的蛋白質(zhì)與RA血清的免疫印跡反應(yīng)顯示,，有三種低鹽溶性抗原是AKA的靶抗原，這些抗原易被蛋白酶K破壞,，因而具有蛋白質(zhì)性質(zhì),。兩種蛋白質(zhì)
分子量為210kD和120—90kD。它們的等電點均在5．8—8．5變化,。第三種蛋白的等電點在4．5一7．2的范圍內(nèi),，其分子量在130～60kD之間。用取自大鼠食管角化層的細(xì)胞角蛋白免疫吸附處理RA血清標(biāo)本后,，不影響它們與上述三種抗原蛋白免疫反應(yīng),。應(yīng)用去糖基化和去磷酸化的方法不能改變這些蛋白質(zhì)的電泳遷徙或它們與RA血清標(biāo)本的免疫反應(yīng)。這些蛋白質(zhì)不同于大鼠表皮（前）絲集蛋白,，而與這些分子的組織特異性變化有關(guān),。這些蛋白質(zhì)的細(xì)胞功能還不明了，可能與（前）絲集蛋白相似,。
3．序列特征 對前絲集蛋白cDNAs和前絲集蛋白基因的分離及分析提示一個多聚蛋白前體是由大量的前后排列的絲集蛋白單位組成的,，具324個氨基酸（972bp）。前絲集蛋白mRNA為13kb,。在顆粒層由三個外顯子轉(zhuǎn)錄而成,，*個外顯子不被翻譯。前絲集蛋白基因位于染色體lq21段具有高度多態(tài)性,，在人類包含10,、11或12重復(fù)序列。相鄰的重復(fù)序列顯示,，氨基序列有20％的差異,，因而產(chǎn)生絲集蛋白等電點的多樣性（7．2—9．4）。氨基末端肽與具有EF臂結(jié)構(gòu)的鈣結(jié)合蛋白序列類似,，如鈣調(diào)蛋白,。事實上,，前絲集蛋白是一種功能性鈣結(jié)合蛋白。這種基因的5’段含有許多調(diào)節(jié)序列,，如維甲酸應(yīng)答片段,。
