 |
上海源葉生物科技有限公司
主營產品： S30260異硫氰酸胍,30259鹽酸胍,嗜熱菌蛋白酶 |
聯系電話
15921386130
公司信息
- 聯系人：
- 何小姐
- 電話：
- 86-021-61559134
- 手機：
- 15921386130
- 傳真：
- 86-021-55068248
- 地址：
- 上海市松江區(qū)長塔路465號6幢
- 郵編：
- 200433
- 網址：
- www.shyuanye.com
核酸雜交技術
2011-7-23 閱讀(992)
核酸雜交技術是較早的應用于病原微生物的檢測技術。因其操作步驟比較煩瑣,，現在在動物檢驗檢疫中應用較少,，但是它是其他一些核酸檢測技術的基礎。它的基本步驟如下,。
首先，制備一段寡核苷酸,，其序列對應于被測病原微生物某段特異性核酸序列,，在此寡核苷酸上進行適當的標記，作為檢測用探針,。
然后,，從樣品中提取核酸，對此核酸進行變性處理后固定在固相載體上,，這些核酸變性處理后多數以單鏈的形式存在,，因此它們能夠利用堿基互補原理，結合并固定探針，由于借助探針上標記的物質可以了解到是否有探針,，甚至有多少探針被固定上去,，再由此推知樣品中是否含有及甚至含有多少病原微生物。
上述是zui常用的固相雜交大致過程,，除此之外還有液相雜交以及用于研究的細胞內定位（原位）雜交模式,。新近發(fā)展的核酸芯片技術實際上也是一類核酸雜交技術。
就固相雜交而言,，又可分為斑點雜交和凝膠電泳印跡轉移雜交,。斑點雜交是直接將標本點在固相載體上雜交，該法迅速簡單,，一次可檢測大量標本,；凝膠電泳印跡轉移雜交是電泳技術和雜交技術結合的一種方法，根據雜交核酸的不同,，又可分為Southern印跡法（檢測DNA）及Northern印跡法（檢測RNA）,。傳統(tǒng)的固相載體多應用硝酸纖維膜和尼龍膜，近年來發(fā)展的微孔板包被技術以微孔板為載體取得了良好的效果,。
探針標記物有放射性核素與非放射性物質兩種,。放射性核素標記敏感性高，可檢測出pg水平的核酸,，但因不易長期保存,，且存在放射性污染等問題，現已較少應用,。非放射性物質常用的有生物素,、地高辛等，非放射性探針安全,、穩(wěn)定,、操作方便并且經濟，但敏感性較低,，近年來,，由于雜交信號檢測方法的改進，檢測的敏感性得到了很大提高,。
