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炭疽的實驗室檢驗診斷技術(shù)

2011-6-11  閱讀(828)

①檢驗材料的采取 疑為因炭疽死亡的動物尸體,,通常不做剖檢,,應(yīng)先自末梢血管采血涂片鏡檢,,作初步診斷,。不進(jìn)行剖檢的尸體可作局部解剖,,采取小塊脾臟,,然后將切口用浸透了濃漂白粉液的棉花或紗布堵塞,,脾臟妥為包裝后送檢。

②鏡檢 取病畜瀕死時或剛死亡動物的血液作涂片標(biāo)本,,用瑞氏染色法或姬姆薩染色法染色,,牛羊炭疽經(jīng)常見到數(shù)量很多的有莢膜炭疽桿菌單個或成對存在,偶有短鏈,,菌端平切,,莢膜呈深紅紫色,。豬炭疽要采取病變部淋巴結(jié)或滲出液涂片檢查。

③培養(yǎng)檢查 無菌采取病畜瀕死期或剛死動物的病理材料,,直接接種于普通瓊脂平板及肉湯培養(yǎng)基上,,置37℃培養(yǎng)18—24h,檢查有無炭疽桿菌生長,。如果檢查材料已經(jīng)陳舊或污染時,,可將血液或組織乳劑先放到肉湯中加溫65~70~C經(jīng)lOh,殺死無芽孢的細(xì)菌,,然后吸取o.$ml接種于普通瓊脂平板培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng),。

檢查生長的菌落,如有疑似炭疽的菌落,,則應(yīng)取得純培養(yǎng),。為了鑒定分離的細(xì)菌為炭疽桿菌,必須接種各種培養(yǎng)基,,觀察菌體的形態(tài),、菌落的形態(tài)及生化反應(yīng),同時接種試驗動物觀察菌體的致病能力,。炭疽桿菌與偽炭疽桿菌有某些類似之處,。

④串珠試驗 炭疽桿菌在適當(dāng)濃度青霉素溶液作用下,菌體腫大形成串珠,,這種反應(yīng)為炭疽桿菌所*,,因此可用此法將之與其他需氧芽孢桿菌相鑒別。取培養(yǎng)4~12h的肉湯培養(yǎng)物三管,,其中兩管各及時加入每毫升含5單位和10單磺嗝顧厝芤?.5ml(zui終濃度含0.5單位和1.0單位)混勻,,另一管加生理鹽水0.5ml作為對照。置37~C孵育1—4h(時間過久,,串珠繼續(xù)膨脹,,容易破裂),取出加入20%福爾馬林溶液0.Stol,,固定10min后,,涂片顯微鏡檢查,找到典型串珠狀者可判定為炭疽桿菌,。

⑤炭疽桿菌莢膜熒光抗體染色
a.抗炭疽桿菌沉淀素?zé)晒饪贵w的制備 取生物制品廠生產(chǎn)的炭疽沉淀血清,,或用炭疽桿菌免疫家兔制得抗血清,將硫酸銨沉淀法提純所得球蛋白用異硫氰酸熒光素標(biāo)記,。
b.以病死畜的血液或脾臟涂片,,固定后滴加標(biāo)記過的抗體,滿蓋玻片,,置室溫或37℃染色30min,,傾去熒光抗體液,,在pH8緩沖鹽水中浸洗10rain(中間換水1次),zui后用蒸餾水輕輕沖洗,,晾干,。
巳在熒光顯微鏡下檢查,找到菌體周圍有肥厚或較薄的發(fā)熒光的莢膜,,菌體較暗或不被染色者可判為陽性,。但發(fā)現(xiàn)不帶莢膜而發(fā)均勻熒光的桿菌,則不能判為炭疽桿菌,。
 



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