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十幾年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者一直從MT培養(yǎng)濾液中提純蛋白質(zhì)抗原,，由于該方法制備蛋白抗原較煩瑣、費(fèi)時(shí),。因此,，近年來(lái)，筆者研究室應(yīng)用基因工程技術(shù)克隆,、表達(dá)MT基因,，簡(jiǎn)便地獲得了大量MT單一的蛋白抗原（如CFPl0、ESAT6,、MPT63,、MPT64、Ag8,、Ag85B,、KatG、16ku,、3Sku,、65ku等蛋白），研究其診斷應(yīng)用價(jià)值,。

（1）血清學(xué)診斷 20世紀(jì)70年代應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)患者血清中結(jié)核特異性抗體,，成為結(jié)核病常用的輔助診斷手段之一，尤其是近十幾年來(lái)金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)已成為無(wú)需特殊儀器的快速診斷技術(shù),。由于結(jié)核患者免疫功能不同而導(dǎo)致對(duì)MT抗原識(shí)別的差異,，此外結(jié)核患者對(duì)抗原的識(shí)別存在階段特異性，目前任何一個(gè)單一的抗原或商品化的組合抗原檢測(cè)試劑盒都無(wú)法檢測(cè)出所有結(jié)核患者血清中的抗結(jié)核抗體,，結(jié)核病患者的抗體反應(yīng)是針對(duì)許多MT抗原的,。因此,，篩選多個(gè)純化的結(jié)核病的特異性抗原組成聯(lián)合抗原是目前血清學(xué)診斷的研究方向,。

（2）皮膚試驗(yàn) 結(jié)核菌素、純蛋白衍生物（PPD）皮膚試驗(yàn)是zui常用且zui簡(jiǎn)便的一種結(jié)核分枝桿菌感染診斷方法,，但由于PPD中含有許多分枝桿菌共同的抗原,，PPD皮試陽(yáng)性并不能鑒別是因?yàn)镸T復(fù)合群感染還是接觸環(huán)境中NTM或卡介苗接種后造成的致敏。因此,，PPD皮試診斷的特異度差,，用該方法進(jìn)行結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查獲得的結(jié)核分枝桿菌感染率并不能真正反映人群中結(jié)核分枝桿菌感染的實(shí)際狀況。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)動(dòng)物模型或臨床試驗(yàn)研究純化抗原,、合成多肽和重組蛋白,，篩選致病性結(jié)核分枝桿菌表達(dá)而B(niǎo)CG不澩锏摹⒂盞計(jì)し舫俜⑿捅涮從?DTH）的特異抗原,，以期建立新的結(jié)核皮膚診斷試劑,。

（3）雙抗體夾心ELISA檢測(cè)細(xì)胞因子水平 目前的研究已表明活動(dòng)性肺結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎或腦膜炎患者血液中或局部組織的T淋巴細(xì)胞,、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞在MT抗原的激活下,，釋放可溶性白細(xì)胞介素（1L-2）受體、膜IL-2受體、γ干擾素（1FN-γ）,、,。腫瘤壞死因子、IL-18和IL-8的水平不同,，與正常人或非結(jié)核性疾病差異有顯著性,。因此，采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)其在血清,、胸腔積液,、腦積液中的水平，對(duì)結(jié)核病具有輔助診斷和鑒別診斷價(jià)值,；對(duì)抗結(jié)核療效和病情轉(zhuǎn)歸的評(píng)價(jià)具有一定的臨床意義,。

（4）T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) MT特異的蛋白抗原（如ESAT6、CFPl0蛋白等）可刺激結(jié)核分枝桿菌感染的人和牛外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）產(chǎn)生增殖反應(yīng)和大量的IFN-γ,，而卡介苗接種的健康人對(duì)該抗原反應(yīng)水平低,，其特異性顯著高于MT超聲抗原和培養(yǎng)濾液。結(jié)核病在疾病發(fā)展的不同階段,，T淋巴細(xì)胞識(shí)別的結(jié)核抗原也不盡相同,，因此，目前正通過(guò)雙抗體夾心ELISA檢測(cè)PBMC受特異抗原刺激后產(chǎn)生IFN-了的水平,，或通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（ELISPOT）檢測(cè)分泌IFN-丁的外周血T淋巴細(xì)胞,，建立新的靈敏度高、特異度強(qiáng)的診斷結(jié)核分枝桿菌感染的特異性方法,。但這些方法均為體外的T細(xì)胞試驗(yàn),，技術(shù)較復(fù)雜，需要高度純化的MT特異的蛋白或多肽抗原及用于細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞因子檢測(cè)的儀器,、設(shè)備,，可能難以在臨床上常規(guī)應(yīng)用。

（5）T細(xì)胞亞群分析 結(jié)核病患者存在明顯的細(xì)胞免疫功能紊亂,，其外周血CD+3,、CD+4T淋巴細(xì)胞下降，CD+8T淋巴細(xì)胞增高,，CD+4／CD+8值降低,，同時(shí)伴有T細(xì)胞活化功能障礙，尤其是活動(dòng)性結(jié)核病更為顯著,；但結(jié)核性胸腔積液中淋巴細(xì)胞比例,、CD+4T淋巴細(xì)胞顯著升高。分析T細(xì)胞亞群的變化對(duì)于病情監(jiān)控,、療效判定和預(yù)后判斷都具有重要意義,，并有助于結(jié)核性和癌性胸腔積液的鑒別,。

（6）紅細(xì)胞免疫功能測(cè)定 紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)新概念是1981年由美國(guó)學(xué)者Siegel提出的，經(jīng)過(guò)20多年國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn),，紅細(xì)胞CRl有黏附C3b,、C4b的能力。測(cè)定結(jié)核病患者紅細(xì)胞免疫黏附能力和紅細(xì)胞免疫黏附促進(jìn)因子,，結(jié)果兩者均明顯低于正常人,，結(jié)核病患者紅細(xì)胞免疫促進(jìn)因子下降可能是其紅細(xì)胞免疫黏附功能降低的重要原因之一。因此,，紅細(xì)胞免疫功能測(cè)定可作為結(jié)核患者免疫功能狀態(tài)的一個(gè)新指標(biāo),，為結(jié)核患者的免疫治療、判斷愈后提供依據(jù),。