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上海源葉生物科技有限公司
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現(xiàn)場(chǎng)或牧區(qū)大群檢疫布氏桿菌病的免疫學(xué)方法
2011-5-25 閱讀(738)
1．虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）
虎紅平板凝集試驗(yàn)是血清凝集試驗(yàn)（SAT）中較常用的一種方法。我國(guó)于1980年開(kāi)始應(yīng)用，目前應(yīng)用廣泛,。其抗原為虎紅染色抗原,。將每份血清樣品取25～30uL放在白搪瓷板,、塑料板或WHO血凝反應(yīng)板上,，在每份血清滴的旁邊加等量抗原,，在zui后一滴抗原加上以后立即混合血清和抗原,，使其形成直徑約2cra的區(qū)域,，室溫下輕微搖晃4min,，凡出現(xiàn)可見(jiàn)凝集反應(yīng)者均判為陽(yáng)性，反之判為陰性,。
RBT試驗(yàn)敏感,，然而，與其他血清學(xué)試驗(yàn)一樣,，由于S19疫苗免疫或假陽(yáng)性反應(yīng)（FPSR）而出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,。假陰性反應(yīng)較少發(fā)生（主要是因?yàn)榍皫Х磻?yīng)），對(duì)血清樣品進(jìn)行稀釋或一定時(shí)間后重復(fù)檢測(cè)可消除這種反應(yīng),。RBT試驗(yàn)可以作為感染畜群的篩查實(shí)驗(yàn),，陽(yáng)性反應(yīng)應(yīng)用合適的確證體系進(jìn)行復(fù)查（包括其他試驗(yàn)檢驗(yàn)和流行病學(xué)調(diào)查）。
2．緩沖布氏桿菌平板凝集試驗(yàn)（BPAT）
取血清80ul與30ul的抗原在玻板上標(biāo)出的4cm×4cm的范圍內(nèi)混合均勻,，接著將板傾斜旋轉(zhuǎn)3次,，以使二者均勻散開(kāi)，然后將板置常溫下（20～25℃）濕盒內(nèi)孵育4min,。再取出如前述旋轉(zhuǎn)3次再孵育4min,。取出玻板，邊轉(zhuǎn)邊觀察凝集情況,。任何可見(jiàn)的凝集均判為陽(yáng)性,。與虎紅平板凝集試驗(yàn)一樣，此法也很敏感,，尤其是對(duì)免疫過(guò)的動(dòng)物,。陽(yáng)性樣品需用驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)進(jìn)行復(fù)查。假陰性的出現(xiàn)通常是由于前帶反應(yīng),，通過(guò)對(duì)血清進(jìn)行稀釋或一定時(shí)間后復(fù)查可消除這種影響,。
3．布氏桿菌病全榛紛詞匝?
抗原由獸醫(yī)生物藥廠供應(yīng)。受檢乳樣須為新鮮的全乳,，采乳樣時(shí)應(yīng)將母畜的乳房用溫水洗凈,、擦干，然后將乳液擠入潔凈的器皿中,，采集的乳樣夏季時(shí)應(yīng)于當(dāng)日內(nèi)檢查,，保存于2℃時(shí)，7天內(nèi)可使用,。取乳樣lml,，加于滅菌凝集試驗(yàn)管內(nèi)，然后取充分振蕩混合均勻的全乳環(huán)狀抗原1滴（約50pL）加入乳樣中充分混勻,。置37-38℃水浴中60min,，加溫后取出試管勿使之振蕩，立即進(jìn)行判定,。按乳脂和乳柱的顏色進(jìn)行判定,，脂肪較少或無(wú)脂肪的牛乳呈陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，菌體呈凝集現(xiàn)象下沉管底,，判定時(shí)以乳柱的反應(yīng)為準(zhǔn),。
