離心機(jī)是借離心力分離液相非均一體系的設(shè)備,。根據(jù)物質(zhì)的沉降系數(shù)、質(zhì)量,、密度等的不同,,應(yīng)用強(qiáng)大的離心力使物質(zhì)分離、濃縮和提純的方法稱為離心,。一般說,,離心機(jī)轉(zhuǎn)速在20 000r/min以上的稱為超速離心機(jī)。離心技術(shù),,特別是超速離心技術(shù)是分子生物學(xué),、生物化學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中*的手段。
用離心方法分離生物大分子和亞細(xì)胞物質(zhì)的基本原理是根據(jù)它們在液體介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區(qū)帶,,或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開,。前者是沉降速度法,應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的zui大密度要小于樣品中zui小顆粒的密度,,離心時(shí)選用高轉(zhuǎn)速和短時(shí)間,;后者是沉降平衡法,應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的zui大密度要大于樣品中zui小顆粒的密度,,離心時(shí)選用較低轉(zhuǎn)速和較長時(shí)間,。實(shí)際操作有幾種形式:
1.差速離心 這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個(gè)不同組分,。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,,在高速離心上清沉降中等顆粒,zui后超速離心上清沉降小顆粒,。采用逐級提高離心力分離上情液的方法,,把不同大小的顆粒分開,。
這種方法比較簡單,方便,。分離的組份沉到管底,,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積,。但回收率和純度是有矛盾的,,要提高回收率,勢必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時(shí)間,,這樣大小相近的顆粒也會(huì)沉到管底,。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。
2.速度區(qū)帶(或速度梯度)離心 本法是將樣品放在一個(gè)連續(xù)的密度梯度液體上,,通過離心,,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢,。經(jīng)過一段時(shí)間,,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來,。它適用于分離密度相同,、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開,。但對密度不同,、大小類似的物質(zhì)則不易分離。
蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì),。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,,用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個(gè)組份,。
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