脈管栓塞、腦血栓中風(fēng),、急性心肌梗死等心血管疾病,，是當(dāng)今社會(huì)中嚴(yán)重危害人們身體健康的主要疾病之一。納豆激酶有很好的溶解血栓的作用,，且在體內(nèi)的半衰期長(zhǎng)達(dá)8天,，比目前盛行的纖溶酶類藥品的半衰期長(zhǎng)。此外,，它還具有天然,、無毒、口服與注射同樣有效,，且作用迅速，可由細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn),，故而可望開發(fā)成為新型的防治血栓病的藥物和保健品,。納豆激酶是納豆菌經(jīng)由大豆發(fā)酵制造出來的生物酶，是由275個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽,，在低于40℃時(shí)活性相對(duì)穩(wěn)定,，高溫時(shí)會(huì)失去活性。凍干法是目前保存生物活性材料方便有效的一種干燥方法,。通過開展納豆激酶凍干研究,，優(yōu)化凍干工藝參數(shù)，可以減小凍干過程中納豆激酶活性的損失,，提高生產(chǎn)效率,。西安工業(yè)大學(xué)的彭潤(rùn)玲博士完成了納豆激酶的冷凍干燥研究。
利用OHAUS公司生產(chǎn)的MB45型水分測(cè)定儀測(cè)定納豆激酶的含水率,，取3次測(cè)量結(jié)果的平均值，確定實(shí)驗(yàn)用納豆激酶溶液的含水率為95.57%,。
用電阻測(cè)定法,，測(cè)量曲線見圖4-6～圖4-9,，確定納豆激酶溶液的共晶點(diǎn)和共熔點(diǎn)溫度為-23℃。
采用真空蒸發(fā)凍結(jié)的方法,，將裝有納豆激酶溶液的料盤放在凍干箱的擱板上，只給捕水器制冷到-40℃之后,，開啟真空泵直接抽真空,。隨著壓力降低，納豆激酶溶液內(nèi)的自由水分蒸發(fā)加劇,，外界不提供蒸發(fā)潛熱,，吸收物料本身的熱量自然降溫而實(shí)現(xiàn)凍結(jié)。
生物酶溶液裝量厚度不同時(shí),，真空蒸發(fā)凍結(jié)過程中溫度隨時(shí)間的變化如圖5-29所示,，厚度小時(shí)，降溫速率比較快,，厚度較大時(shí),，降溫速率較慢，但對(duì)最終凍結(jié)溫度的影響不大,，均低于-34℃的共晶點(diǎn)溫度,。
納豆激酶溶液的厚度與降溫速率之間的關(guān)系如圖5-30所示，圖中離散點(diǎn)為實(shí)測(cè)值,，實(shí)線為回歸方程曲線,。回歸方程為C=11.41608-0.50899h,。
式中,，c為降溫速率，℃/min,；h為物料厚度,，mm。相關(guān)系數(shù)R=0.99691,。根據(jù)回歸方程可求出物料不同厚度(3～15mm)時(shí)的降溫速率,。
真空度降到500Pa左右時(shí)，物料溫度迅速下降,，同時(shí)可觀察到物料會(huì)起泡,，甚至產(chǎn)生飛濺現(xiàn)象。另外在物料厚度超過10mm時(shí),，還會(huì)有二次沸騰現(xiàn)象,。這是因?yàn)樵?00Pa左右，物料表面蒸發(fā)速率非?？?，物料上層會(huì)先凍結(jié),，物料下層來不及凍結(jié)，但之后凍結(jié)層上空壓力還在繼續(xù)減小,，凍結(jié)層上下壓差產(chǎn)生的壓力大于凍結(jié)層的強(qiáng)度,，會(huì)引起二次沸騰，蒸發(fā)加速,，造成降溫速率又一次突然增加,，這一點(diǎn)從圖5-29中也可以看出來。實(shí)驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn)若將擱板溫度預(yù)先降到-10℃,，可大大減小因沸騰導(dǎo)致的飛濺現(xiàn)象,。
上述納豆激酶溶液采用真空蒸發(fā)凍結(jié)方法凍結(jié)后，繼續(xù)抽真空,，并用隔板加熱,，以補(bǔ)充升華熱。圖5-31中為裝料厚度為6mm時(shí),，納豆激酶溶液的抽真空凍結(jié)干燥過程典型的工藝曲線,。
在納豆激酶含水量為95.57%的條件下，采用表5-14所示因素三水平的正交實(shí)驗(yàn),，得出的綜合結(jié)果列于表5-15中,。干燥后的納豆激酶含水量最高為4.64%。
從表5-15極差R1可看出,，凍干過程中幾個(gè)影響納豆激酶活力的因素主次順序是：控制溫度,、凍結(jié)方式、真空室壓力,、物料厚度,。試驗(yàn)4酶活力最高，工藝參數(shù)為控制溫度-5℃,，裝料厚度6mm, 真空蒸發(fā)凍結(jié)，真空室壓力10Pa,干燥時(shí)間730min,。從表5-15極差R1可看出,，凍干過程中幾個(gè)影響凍干總時(shí)間的因素主次順序是：物料厚度、凍結(jié)方式,、控制溫度,、真空室壓力，實(shí)驗(yàn)3時(shí)間最短,，但酶的活性不高,，且一次加載的干燥量少，綜合考慮試驗(yàn)4工藝最好,。
納豆激酶物料厚度較小時(shí),，適合抽真空凍結(jié)干燥,，抽真空凍結(jié)速率快，不僅酶活率高,，還節(jié)省了預(yù)凍時(shí)間,，且預(yù)凍時(shí)納豆激酶溶液內(nèi)的自由水開始蒸發(fā)，干燥（濃縮）即已開始,，縮短了總的干燥時(shí)間,，提高了生產(chǎn)效率。
研發(fā)合理的凍干添加劑,，如添加甘油,、丙二醇、牛血清蛋白,、明膠,、海藻酸鈉等有利于縮短了總的干燥時(shí)間，提高了生產(chǎn)效率,。提高酶的熱穩(wěn)定性,，可進(jìn)一步提高酶的存活率，升高控制溫度,，減少干燥時(shí)間,。
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